雞IGFⅡ基因與GRB10基因印記狀況的研究.pdf

1、IGF2基因、GRB10基因是哺乳動(dòng)物的印記基因,該研究通過檢測(cè)等位基因表達(dá)考察雞的IGF2基因、GRB10基因的印記狀況.類胰島素生長(zhǎng)因子-Ⅱ(IGF2)是一種促有絲分裂多肽類激素.利用PCR-SSCP方法在一個(gè)烏雞家系父母代對(duì)IGF-Ⅱ基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè).在該基因外顯子1、外顯子2中發(fā)現(xiàn)多態(tài)位點(diǎn),這兩個(gè)位點(diǎn)呈連鎖遺傳.測(cè)序結(jié)果顯示外顯子1的第72(自第一密碼子開始)位堿基有C/G突變.分別選取1日齡、90日齡雜合子×純合子后代與純合

2、子×雜合子后代,檢測(cè)IGF2在這兩位點(diǎn)的基因型.對(duì)于確定為雜合子的后代,重新設(shè)計(jì)一對(duì)包含突變位點(diǎn)、并跨內(nèi)含子2的引物,取同日齡純合子個(gè)體作對(duì)照,利用RT-PCR-SSCP檢測(cè)1日齡烏雞肝臟,90日齡烏雞肝臟、肌肉、心臟、腎臟組織中等位基因表達(dá)狀況.結(jié)果顯示,雞的IGF2基因兩個(gè)等位基因均等表達(dá),表明雞的IGF2基因不受印記控制.GRB10基因在體內(nèi)與胰島素受體、類胰島素1型受體結(jié)合,抑制相應(yīng)激素與受體的結(jié)合.盡管哺乳類GRB10蛋白研究

3、很多,但是目前,雞的GRB10基因尚無報(bào)道.該研究通過對(duì)cDNA文庫(kù)中一個(gè)包含GRB10基因的克隆測(cè)序,得到雞的GRB10基因的3′端序列.利用5′RACE方法,克隆得到了雞的GRB10基因的全部編碼區(qū)序列、3′非翻譯區(qū)與部分5′非翻譯區(qū).GRB10基因的編碼區(qū)包含1791bp的DNA序列,雞與人和小鼠核苷酸序列同源性分別為78％和66％.外顯子結(jié)構(gòu)上,雞與小鼠的編碼區(qū)結(jié)構(gòu)相似:在第4、5外顯子之間含一個(gè)75bp的可變剪接(編碼25個(gè)氨

4、基酸殘基),而且,較長(zhǎng)的剪接體不是常見的存在形式.雞的GRB10基因編碼596個(gè)氨基酸的多肽,與人GRG10蛋白的氨基酸同源性為81％,雞與小鼠氨基酸同源性為64％.利用直接測(cè)序方法對(duì)雞GRB10基因的cDNA在6只明星雞與6只絲烏骨雞進(jìn)行多態(tài)性分析,結(jié)果顯示,在cDNA多態(tài)性分析共發(fā)現(xiàn)4個(gè)SNP位點(diǎn),在編碼區(qū)273bp、421bp、848bp三個(gè)位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)都存在A/G突變;在編碼區(qū)966bp,發(fā)現(xiàn)CT/突變,這些突變共同的特點(diǎn)是都位于