人類Grb10基因和hPPB基因的克隆及功能研究.pdf

1、細胞凋亡是多細胞生物調節(jié)機體結構和功能的重要途徑。在生理情況下，細胞凋亡可能為默認的途徑。細胞通過感受細胞因子和周圍環(huán)境的的刺激而使細胞脫離凋亡過程。該過程的障礙可能是退行性疾病和腫瘤發(fā)生的基本相關因素。 本實驗通過酵母雙雜交得到與線粒體凋亡途徑中重要功能分子him相互作用的蛋白GrblO。GrblO蛋白為生長因子受體結合蛋白，是酪氨酸受體的分子伴侶，參與多種信號轉導與調節(jié)。其家族保守功能域包括N端的富含脯氨酸的區(qū)域，中間GM區(qū)

2、的RA結構域和PH結構域，以及C端的SH2結構域。酵母雙雜交結果提示，GrblO可能參與bim介導的凋亡信號通路。我們對GrblO進行全長蛋白的基因克隆，GST融合蛋白的表達和純化，對其與bim進行Pull—down和免疫共沉淀等體內體外結合實驗，以及檢測細胞凋亡觀察GrblO對him功能的影響。Pull—down體外結合實驗顯示GrblO與him有相互作用。細胞凋亡檢測顯示GrblO對bim過表達引起的凋亡有抑制作用。 在對A

3、D293和HEK293進行差減雜交實驗以探索兩者在黏附和凋亡特性的差異時，在AD293的高表達文庫里分離得到一段新的cDNA片段。我們從人類胎腦文庫克隆得到該基因，全長2745bp，編碼的蛋白含518個氨基酸，被預測為磷酸泛酰巰基乙胺結合蛋白一hPPB。該基因定位在2p22．3，包含8個外顯子。該cDNA序列編碼的蛋白序列含有一個凋亡抑制蛋白5結構域，外皮蛋白重復片斷和銅結合辛肽重復片斷。RT一PCR分析顯示該基因在人類正常組織和癌組織