豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的豬肺中eNOS及其相關(guān)因子表達(dá)量變化的研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是一種傳染性極強(qiáng)的豬病，臨床主要表現(xiàn)為流產(chǎn)、早產(chǎn)等繁殖障礙和不同程度的呼吸癥狀，如呼吸困難、肺炎等。病死豬剖檢通?？梢?jiàn)肺部出現(xiàn)彌漫性間質(zhì)性肺炎并伴有大量出血點(diǎn)，因此肺部病變導(dǎo)致的肺損傷是造成豬死亡的主要因素之一。
　　PRRSV感染豬的過(guò)程中，肺損傷的形成可能與血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能的改變關(guān)系密切。一氧化氮(NO)是可以改變內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和功能的因素之一，而內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)控制著血管內(nèi)皮

2、細(xì)胞中NO的合成。因此，eNOS及其相關(guān)因子的含量變化可能會(huì)與PRRSV感染豬造成肺損傷有所關(guān)聯(lián)。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)PRRS中的eNOS及其相關(guān)因子變化的研究，闡明豬PRRS中肺臟炎癥反應(yīng)及肺損傷的相關(guān)分子機(jī)理，為PRRS的預(yù)防與治療提供思路。
　　本實(shí)驗(yàn)所用樣品均為大白豬豬肺，分為三組:正常對(duì)照豬肺樣本、臨床PRRS豬肺樣與人工攻毒PRRS豬肺樣。通過(guò)熒光定量PCR對(duì)比了eNOS與iNOS在PRRS病豬中的變化;Western b

3、lot對(duì)比了eNOS與微囊蛋白-1的含量變化;分別通過(guò)硝酸還原酶法與化學(xué)熒光法檢測(cè)了肺組織內(nèi)NO和活性氧簇(ROS)含量變化。通過(guò)蘇木精-伊紅染色和免疫組化對(duì)比血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)變化和eNOS蛋白含量變化。
　　結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，臨床組與攻毒組中eNOS的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P＜0.05);iNOS的mRNA變化不顯著（P＞0.05）;eNOS蛋白表達(dá)量顯著升高，Cav-1蛋白表達(dá)量臨床組中升高;NO含量顯著降低(

4、P＜0.05);ROS含量變化不顯著（P＞0.05）;病理組織學(xué)結(jié)果表明，與正常豬相比，PRRS病豬肺中的大血管結(jié)構(gòu)破損，毛細(xì)血管管徑變小并且數(shù)目減少;免疫組化中eNOS蛋白顯著升高（P＜0.05）。
　　研究結(jié)論:
　　1.臨床感染的PRRS病豬與攻毒的PRRS病豬在實(shí)驗(yàn)結(jié)果上呈現(xiàn)出一定的符合性;
　　2.PRRSV的感染可以導(dǎo)致病豬肺內(nèi)的NO含量下降，而eNOS的mRNA和蛋白均上升，表明PRRSV感染可能導(dǎo)致eN