豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬偽狂犬病病毒的分離、鑒定.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種新的、高度傳染性疾病.近年來,全國各地很多豬場都出現(xiàn)了以母豬繁殖障礙、仔豬呼吸困難為特征的傳染病.為了弄清病因,解決生產(chǎn)實際,特此開展了豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬偽狂犬病病毒的分離和鑒定工作.1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒分離、鑒定 利用MARC-145細胞,從湖北、湖南、江西、河南、

2、浙江等地發(fā)病仔豬和流產(chǎn)胎兒的肺臟中分離到疑似PRRSV多株,并對其中一株病毒進行了全面的鑒定.該病毒在MARC-145細胞上增殖滴度為10<'-4.39>/0.1ml,對氯仿敏感,56℃,1h完全滅活,不耐酸堿,不能被5'-碘脫氧尿核苷(IUDR)所抑制.在電鏡下,病毒粒子呈球形,有囊膜,大小約為50~65nm.能被美洲型PRRSV陽性血清所中和,而不能被抗豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬細小病毒、豬乙型腦炎病毒等的陽性血清中和.為了進一步

3、從分子生物學(xué)進行鑒定,設(shè)計了特異性引物對病毒的囊膜蛋白基因(ORF6)進行了RT-PCR擴增,擴增到大小約為500bp的片段,與預(yù)期大小相當(dāng),而陰性對照則不能擴增出相應(yīng)大小的片段.根據(jù)以上結(jié)果,證實所分離的病毒為豬繁殖與呼吸綜合征病毒,并且屬于美洲型,命名為PRRSV HA株.2 豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5和ORF7基因的克隆及序列分析 根據(jù)GenBank上PRRSV VR-2332株的核苷酸序列,設(shè)計兩對分別包含ORF5和ORF7

4、基因完整編碼區(qū)的引物.使用Blast軟件分析發(fā)現(xiàn)PRRSV HA株ORF5基因和ORF7基因與美洲型代表株VR-2332株、中國分離的Bj-4株、歐洲型代表株LV株的核苷酸同源性分別是98﹪、99﹪、705,995、99﹪、93﹪.3 豬偽狂犬病病毒的分離及初步的鑒定 從湖北宜城市某豬場流產(chǎn)胎兒的內(nèi)臟組織中分離到一株P(guān)RV,并進行了初步的鑒定.通過實驗證實所分離的病毒為PRV,命名為PRV YC株.用TCID<,50>為10<'-6.6