一個新的煙草糖基轉(zhuǎn)移酶基因sm-Ngt1在轉(zhuǎn)基因煙草中的功能研究.pdf

1、糖基轉(zhuǎn)移酶(Glycosyltransferases,GTs)是一種催化糖基與特異受體分子結合，形成糖苷鍵的酶。糖基轉(zhuǎn)移酶催化的糖基化在植物信號識別、物質(zhì)轉(zhuǎn)運和次級代謝過程中起著重要的作用。
　　 本實驗室以煙草為材料，克隆了一個新的受甲基茉莉酸(MeJA)和水楊酸(SA)雙重誘導表達的糖基轉(zhuǎn)移酶基因sm-Ngt1?；趐CAMBIA1302和pCAMBIA1301載體，本實驗室前期研究分別構建了sm-Ngt1基因與綠色熒光蛋白

2、(GFP)基因融合的植物表達載體pGT-GFP，以及5個不同的5’端缺失的sm-Ngt1基因啟動子片段與GUS報告基因融合的植物表達載體pGTPA、pGTPB、pGTPC、pGTPD和pGTPE，并且采用農(nóng)桿菌介導的植物轉(zhuǎn)基因技術獲得了轉(zhuǎn)基因煙草植株及其后代。本研究分析了這些融合基因在轉(zhuǎn)基因煙草后代植株中的表達和定位。研究結果如下：
　　 1、組織化學檢測結果表明，gus基因在pGTPA、pGTPB、pGTPC和pGTPD轉(zhuǎn)基因

3、植株后代的根，葉和花中都有表達，其中，在pGTPC和pGTPD轉(zhuǎn)基因植株后代中強表達，而在pGTPE轉(zhuǎn)基因植株中表達量較低。
　　 2、T1代轉(zhuǎn)基因植株中，GUS酶活性與T0代轉(zhuǎn)基因植株中的酶活測定結果一致，進一步證明在啟動子序列的-800～-524bp間存在MeJA和SA的誘導元件，而在-524～-220bp間存在超表達元件。pGTPC和pGTPD啟動子片段轉(zhuǎn)基因煙草植株中，gus基因的組成型表達量遠超過CaMV35S啟動子的

4、轉(zhuǎn)基因植株。
　　 3、在sm-Ngt1基因超表達的T1代轉(zhuǎn)基因煙草植株中，出現(xiàn)了一些變異表型，如植株矮化，莖增粗，葉脈排列不規(guī)則、增粗，葉上表皮氣孔少而大，腺毛粗、分叉。通過一系列的石蠟切片觀察發(fā)現(xiàn)，在sm-Ngt1超表達的T1代轉(zhuǎn)基因植株中，葉和莖的木質(zhì)部導管數(shù)量、薄壁細胞長度和莖維管束長度明顯與W38野生型植株對照不一樣。
　　 4、對pGT-GFP載體T1代轉(zhuǎn)基因煙草植株的組織化學檢測結果表明，GT-GFP融合蛋