雞胚成纖維細胞感染馬立克氏病病毒后3號染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的研究.pdf

1、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability，MSI)廣泛存在于人類腫瘤的基因組中。雞馬立克氏病(MD)是雞的一種危害最嚴重的病毒所致的腫瘤性疾病，目前國內(nèi)外鮮有關于雞馬立克腫瘤發(fā)生后宿主基因組的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的報道，其他家畜腫瘤上也沒有宿主基因組MSI的研究報告。通過檢測雞胚成纖維細胞感染馬立克氏病超強毒RB1B株后，雞三號染色體上的基因組微衛(wèi)星不穩(wěn)定性情況，旨在發(fā)現(xiàn)是否存在與雞馬立克氏病發(fā)生相關的宿主基因組改

2、變，為從宿主的角度研究雞馬立克腫瘤發(fā)生和發(fā)展的生物學提供基礎研究資料。 在本實驗中應用27個SPF雞胚，培育雞胚成纖維細胞，來自同一雞胚個體的成纖維細胞一半接種馬立克氏病超強毒RB1B株，另一半不接毒，作為對照。分別提取培養(yǎng)細胞的基因組DNA，選取雞三號染色體上27個微衛(wèi)星標記，分別采用聚合酶鏈式反應、PAGE電泳、銀染等技術檢測基因組微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。結果，27個微衛(wèi)星位點中有20個出現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，平均變化頻率為16.30％

3、，變化頻率最高的為ABR141、MCW259、ABR426(25.93％)；沒有檢測到雜合性缺失。24例雞胚有兩個或兩個以上位點出現(xiàn)基因組變化。 本研究首次發(fā)現(xiàn)雞胚成纖維細胞感染馬立克氏病病毒后3號染色體上存在多位點的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。感染馬立克氏病病毒后CEF可出現(xiàn)多個微衛(wèi)星位點的改變，提示MDV感染CEF早期可能會整合到宿主的多個位點引起基因組的變化。以PCR、電泳和銀染為基礎的微衛(wèi)星技術可以快速、有效地檢測出染色體內(nèi)部基因組