馬立克腫瘤及接種火雞皰疹病毒活疫苗后的SPF雞微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的研究.pdf

1、馬立克氏病是一種雞常見的腫瘤疾病，目前尚未見到對(duì)其早期腫瘤診斷的研究報(bào)告。除本實(shí)驗(yàn)室外，關(guān)于雞感染馬立克氏病后宿主基因組的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的報(bào)道未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過SPF雞感染馬立克氏火雞皰疹病毒活疫苗株后，利用部分微衛(wèi)星位點(diǎn)定期檢測宿主基因組微衛(wèi)星不穩(wěn)定的情況，意在發(fā)現(xiàn)宿主感染弱毒后基因組微衛(wèi)星有沒有發(fā)生MSI和LOH變化，進(jìn)一步研究雞馬立克氏病發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定性變化和抗病育種提供基礎(chǔ)性研究資料，為早期診斷馬立克氏腫瘤病提供研究性基礎(chǔ)資

2、料。
　　 試驗(yàn)一、某雞場爆發(fā)馬立克氏病的患雞進(jìn)行臨床診斷、病理診斷、分子生物診斷；試驗(yàn)二、采用PCR、PAGE、銀染技術(shù)，利用預(yù)選的45個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，對(duì)爆發(fā)馬立克氏病的患雞進(jìn)行微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的研究；試驗(yàn)三、通過飼養(yǎng)40只SPF雞，10日齡人工接種弱毒（雞馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗），接種兩周后心臟采血，以后定期心臟采血，分離淋巴細(xì)胞，采集正常組織作為對(duì)照，提取細(xì)胞基因組DNA，在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇45個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，采用聚

3、合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、銀染等技術(shù)檢測基因組微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。
　　 試驗(yàn)研究結(jié)果：1）經(jīng)一系列診斷確診某雞場爆發(fā)的是馬立克氏病，屬禽皰疹病毒Ⅰ型；2）所預(yù)選的45個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，有39個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定性，研究還得出腫瘤組織和淋巴細(xì)胞的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的變化存在75.6％符合率，為后期試驗(yàn)提供了保障；3）SPF雞接種弱毒（雞馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗）后有44個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)出現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性

4、變化，主要發(fā)生在前三、四次采集的樣品，發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的雞第五次采集的樣品中檢測不到微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。
　　 本試驗(yàn)用人工接種活疫苗后，首次利用微衛(wèi)星不穩(wěn)定性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星前期發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定性后期恢復(fù)到正常狀態(tài)這種現(xiàn)象，引起這種現(xiàn)象可能由于自身的修復(fù)系統(tǒng)、免疫反應(yīng)，中和反應(yīng)等綜合作用的結(jié)果，為研究馬立克氏病的早期診斷提供一個(gè)新思路、新角度，更為后期試驗(yàn)以PCR、電泳和銀染為基礎(chǔ)的微衛(wèi)星技術(shù)快速、有效地早期檢測馬立克氏病提