馬立克氏病病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞后4號(hào)染色上基因微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究.pdf

1、目的：微衛(wèi)星不穩(wěn)定性廣泛地應(yīng)用于腫瘤病的檢測(cè)，但是應(yīng)用微衛(wèi)星技術(shù)研究馬立克氏病病毒，致瘤型的病毒感染引起基因組變化的還未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用馬立克氏病病毒的強(qiáng)毒株RB1B感染雞胚成纖維細(xì)胞后，應(yīng)用雞4號(hào)染色體上20個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，旨在發(fā)現(xiàn)馬立克氏病病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞是否引起基因微衛(wèi)星的改變，研究病毒感染早期階段的基因組變化，為此病的早期診斷提供線索。 方法：用雞4號(hào)染色體上20個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記為引物。做雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，獲得含實(shí)

2、驗(yàn)和對(duì)照的32組樣本，提取細(xì)胞中的基因組DNA。利用20個(gè)微衛(wèi)星引物，以同源的自體作為對(duì)照進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物，采用12％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染后觀察結(jié)果，觀察微衛(wèi)星條帶的改變。 結(jié)果：20個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，有18個(gè)標(biāo)記發(fā)生不同百分率的MSI，18/20(90.00％)表現(xiàn)出微衛(wèi)星不穩(wěn)定性陽(yáng)性，有2個(gè)標(biāo)記沒有檢測(cè)到變化，占微衛(wèi)星標(biāo)記2/20(10.00％)。檢測(cè)到MSI的微衛(wèi)星位點(diǎn)，表現(xiàn)出不同的百分率，4個(gè)位點(diǎn)發(fā)生較高的MS

3、I，這4個(gè)位點(diǎn)分別為：ABR0622，MCW0174，ADL0266，和ABR0382，MSI發(fā)生率分別為37.50％，31.75％，31.75％和31.75％。6個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，檢測(cè)到MSI發(fā)生率大于20％，占總微衛(wèi)星標(biāo)記的6/20(30.00％)．微衛(wèi)星標(biāo)記檢測(cè)到MSI較集中在15.00％-30.00％之間，此階段的微衛(wèi)星標(biāo)記有8個(gè)，占總微衛(wèi)星標(biāo)記的8/20(40.00％)。檢測(cè)到的微衛(wèi)星標(biāo)記發(fā)生MSI最低為3.13％，這樣的位點(diǎn)僅有

4、2個(gè)，占微衛(wèi)星標(biāo)記比率的2/20(10.00％)。 接種馬立克氏病病毒的雞胚成纖維細(xì)胞樣本有30/32(93.06％)表現(xiàn)出MSI．不同樣品MSI統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明11號(hào)樣品，MSI發(fā)生率最高為45.00％。3號(hào)樣品的發(fā)生率也較高為35.00％；有16組樣本檢測(cè)到MSI+，占測(cè)樣本總量的16/32(50.00％)，有14組樣本檢測(cè)到低頻的MSI(MSI-L)，占總檢測(cè)樣本量的14/32(43.75％)，只有兩組沒有檢測(cè)到MSI變化表現(xiàn)