豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究姓名：華利忠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)指導(dǎo)教師：張書霞201012豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究法)，血清細(xì)胞色素C(ELISA法)濃度的檢測(cè)；取肺臟、心臟、肝臟、腎臟、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)和支氣管淋巴結(jié)等，觀察肉眼和組織病理變化結(jié)果：所有攻毒豬均出現(xiàn)病毒血疽組織病理學(xué)變化，在21d時(shí)最為嚴(yán)重，主要以出血性間質(zhì)性肺炎，淋巴組織淋巴細(xì)胞缺失

2、及巨噬細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肝炎及腎炎為特征血清PCV2抗體及細(xì)胞色素C濃度均隨著攻毒時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著升高，并且兩者呈顯著正相關(guān)結(jié)論：成功復(fù)制出了豬圓環(huán)病毒病動(dòng)物模型，且血清細(xì)胞色素C可以作為PCVD病程發(fā)展的重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)在成功復(fù)制的PCVD模型上，選取病變最嚴(yán)重的兩個(gè)外周免疫器官：腹股溝淋巴結(jié)和脾臟，探討在PCV2感染過(guò)程中誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化及其主要凋亡途徑方法：取腹股溝淋巴結(jié)和脾臟，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；熒光定量RTP

3、CR檢測(cè)Fas／FasL及bcl2／baxmRNA表達(dá)量；分光光度法檢測(cè)oaspase3，caspase8和caspase9的活性：熒光分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ca2濃度，孔雀綠比色滴定盒檢測(cè)Ca2ATP酶的活性，熒光定量RTPCR檢測(cè)鈣／鈣調(diào)素依賴性磷酸激酶ⅡmRNA相對(duì)表達(dá)量；放射免疫法檢測(cè)cAMP和cGMP濃度同時(shí)檢測(cè)血清中sFas／sFasL濃度的變化腹股溝淋巴結(jié)試驗(yàn)結(jié)果：(1)細(xì)胞凋亡率：三個(gè)實(shí)驗(yàn)組仔豬腹股溝淋巴結(jié)的細(xì)胞凋亡率均顯

4、著高于對(duì)照組(P005)，caspase9的活性變化不大(p005)(5)細(xì)胞內(nèi)【cal和c02ArP酶活性：三個(gè)攻毒組腹股溝淋巴結(jié)細(xì)胞內(nèi)[cal均顯著高于對(duì)照組(p001)，并且21d時(shí)最高；Ca2加T酶活性，21d時(shí)顯著下調(diào)(po05)；CaMKⅡmRNA表達(dá)量在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中變化不大(6)cAMP和cGMP含量的變化：cGMP濃度在攻毒后21d時(shí)顯著下降(po05)，而cAM])濃度變化不大，但三個(gè)攻毒組cAMP／cGMP比值均顯

5、著高于對(duì)照組(po05)脾臟試驗(yàn)結(jié)果：(1)脾臟細(xì)胞凋亡率，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(p001)，并且14d的凋亡率最高：(2)FasLmRNA水平，在攻毒后21d顯著高于對(duì)照組(薩o05)，35d時(shí)極顯著高于對(duì)照組(p001)；FasmRNA35d時(shí)的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P005)；(3)baxmR_NA的表達(dá)量，相比對(duì)照組14d時(shí)顯著下降，35d時(shí)極顯著升高(P001)，bax／bcl2比值，14d和21d時(shí)比對(duì)照組顯著下調(diào)(廬