綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化.pdf

1、骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞是成體肌源性干細(xì)胞，在各種成體干細(xì)胞研究中越來(lái)越受到人們的關(guān)注。雖然從一些物種(如小鼠、大鼠和人)的骨骼肌中已經(jīng)成功分離出衛(wèi)星細(xì)胞，但對(duì)于家畜(如牛、綿羊)的研究卻很少。在家畜轉(zhuǎn)基因的研究和生產(chǎn)過(guò)程中，需要在動(dòng)物生產(chǎn)之前對(duì)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系進(jìn)行基因表達(dá)的鑒定和驗(yàn)證。因此，家畜骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立就顯得特別迫切和重要。
　　 本研究以綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞作為研究對(duì)象，重點(diǎn)探討衛(wèi)星細(xì)胞的分離、純化及體外培養(yǎng)方法，并

2、對(duì)得到的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，旨在建立可穩(wěn)定傳代的綿羊衛(wèi)星細(xì)胞系及其鑒定方法，為今后綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在家畜繁育和再生醫(yī)學(xué)等相關(guān)方面的研究和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 用兩步酶消化法和差速貼壁法分離和純化綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行鑒定和誘導(dǎo)分化，分析其多能性。結(jié)果表明，0.1％I型膠原酶和0.25％胰蛋白酶兩步消化法分離綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞效率較高，含20％FBS+10％馬血清的培養(yǎng)基更有利于綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的體外培養(yǎng)。
　　

3、 用免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中幾個(gè)標(biāo)記基因Desmin、α-Sarcomeric Actinin、MyoD1、Myf5和PAX7的表達(dá)情況，本研究得到的細(xì)胞中這5個(gè)基因表達(dá)均呈陽(yáng)性，說(shuō)明分離得到的細(xì)胞為綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞。
　　 為驗(yàn)證其多能性，將分離得到的衛(wèi)星細(xì)胞向成肌、成脂和成骨三個(gè)方向誘導(dǎo)。成肌誘導(dǎo)后形成明顯的多核肌管細(xì)胞，標(biāo)記基因MyoG表達(dá)陽(yáng)性，快肌肌球蛋白細(xì)胞免疫熒光染色呈陽(yáng)性；成骨誘導(dǎo)后經(jīng)茜素紅和