葡萄卷葉病毒-3檢測(cè)技術(shù)與脫除方法研究.pdf

1、葡萄卷葉病(Grapevine leafroll disease)是葡萄上一種重要的病毒病，現(xiàn)已研究表明引起該病的病原不止一種，目前國(guó)際上承認(rèn)的已有11種，其中葡萄卷葉伴隨病毒-3(GLRaV-3)是最主要的一種。進(jìn)行病毒脫毒處理、推廣無毒化栽培對(duì)我國(guó)葡萄產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。本研究以優(yōu)良的釀酒葡萄品種蛇龍珠病株為材料，對(duì)GLRaV-3檢測(cè)技術(shù)和脫除方法進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.通過對(duì)GLRaV-3DAS-

2、ELISA和RT-PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化，建立了GLRaV-3檢測(cè)技術(shù)體系。
　　 2.對(duì)比研究了GLRaV-3 DAS-ELISA和RT-PCR兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)效果。研究結(jié)果表明，針對(duì)同一感病材料，利用RT-PCR在試驗(yàn)所設(shè)的第一次檢測(cè)時(shí)間(6月份)就能檢測(cè)到該病毒，而DAS-ELISA直到試驗(yàn)所設(shè)的第二次檢測(cè)時(shí)間(7月份)才能檢測(cè)到該病毒，確定RT-PCR法檢測(cè)的靈敏度高于DAS-ELISA。
　　 3.利用半定量R

3、T-PCR法對(duì)比研究了不同部位、不同檢測(cè)時(shí)間對(duì)GLRaV-3檢測(cè)結(jié)果靈敏度的影響。研究結(jié)果表明，不同部位之間檢測(cè)靈敏度大小排序?yàn)椋喉g皮部>葉柄>葉片；不同檢測(cè)時(shí)間靈敏度大小排序?yàn)椋?月>8月>7月>6月。
　　 4.通過對(duì)葡萄組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)條件的優(yōu)化，確定透光、透氣性好的封口膜更適于葡萄組織培養(yǎng)容器的封口。在同等培養(yǎng)條件下，健康試管苗的生長(zhǎng)勢(shì)明顯優(yōu)于帶毒試管苗，帶GLRaV-3的植株生根遲，生長(zhǎng)緩慢。
　　 5.對(duì)比

4、研究了莖尖培養(yǎng)與熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)兩種脫毒方法對(duì)GLRaV-3的脫除效果。研究結(jié)果表明，當(dāng)莖尖大小為0.2-0.5 mm時(shí)，莖尖成活率為40%，莖尖培養(yǎng)脫毒率為30%，有效脫毒率為12%，熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒率為90%，有效脫毒率為36%，莖尖大小為0.8-1.0mm時(shí)，莖尖成活率為93.3%，莖尖培養(yǎng)脫毒率為10%，有效脫毒率為9.3%，熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒率為60%，有效脫毒率為56%。熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)的脫毒效果明顯高于莖尖培