水貂犬瘟熱病毒與抗體檢測方法的研究.pdf

1、本文進(jìn)行了如下研究： 1.通過對(duì)河北、山東等地疑似犬瘟熱的水貂臨床癥狀和病變進(jìn)行研究，探討水貂犬瘟熱的臨床癥狀和病變新特點(diǎn)，并進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。研究發(fā)現(xiàn)近幾年患病水貂出現(xiàn)臨床癥狀病變新的變化，足墊的角質(zhì)化、皮膚病變現(xiàn)象逐漸減少，后肢癱瘓癥狀增多。病變與其他疫病癥狀相類似，缺乏特征性病變。發(fā)病急，死亡率高。一年四季都有發(fā)生。 2.取一發(fā)病水貂的肝、脾、腦等組織，常規(guī)處理后接種MDCK細(xì)胞分離病毒，采用RT-PCR檢測病毒。

2、結(jié)果顯示，應(yīng)用MDCK細(xì)胞分離病毒，傳3代后出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變。利用特異性引物，對(duì)病毒分離的細(xì)胞培養(yǎng)物和疫苗株分別提取總RNA進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，得到長度為294bp的特異性片段，證明了CDV的感染。 3.本試驗(yàn)篩選出PBST為樣品稀釋液，建立膠體金試劑盒。對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測，結(jié)果表明：敏感性試驗(yàn)中，陽性病料經(jīng)倍比稀釋處理，經(jīng)試紙條檢測最高稀釋倍數(shù)為23；阻斷試驗(yàn)中，貂抗CDV高免血清能特異地阻斷陽性反應(yīng)；交叉試驗(yàn)顯示犬細(xì)小病毒

3、、犬傳染性肝炎、犬冠狀病毒均為陰性；不同批次的試紙條各檢測5份陽性病料，均呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，表明重復(fù)性高；將測試條低溫干燥密封保存，每隔一周檢測同一份陽性樣品，在半年內(nèi)其檢測結(jié)果不變；應(yīng)用試驗(yàn)結(jié)果表明肺和腦為檢測首選的組織樣品；臨床癥狀及病理變化診斷、RT-PCR和膠體金快速診斷三種抗原檢測方法的比較表明膠體金快速診斷適用于快速臨診診斷。 4.本試驗(yàn)提純水貂免疫球蛋白，制備HRP-兔抗水貂免疫球蛋白抗體，為間接ELISA提供二抗，瓊