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文檔簡介
1、本研究從感染馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)的馬鈴薯葉片中提取出病毒RNA進(jìn)行cDNA合成并運用RT-PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增,得到了符合理論設(shè)計的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,將這些產(chǎn)物正反向插入到經(jīng)改造的適合轉(zhuǎn)化馬鈴薯的雙元載體RNA干涉區(qū),成功構(gòu)建了馬鈴薯卷葉病毒RNA干涉載體。主要研究結(jié)果如下:
?。?)利用Trizol法直接從感PLRV的馬鈴薯葉片中提取了PLRV總RNA;
(2)通過分析馬鈴薯卷葉病毒基因組序列,設(shè)計了6對引物。
2、RT-PCR擴(kuò)增出5對引物的產(chǎn)物,大小分別為240bp、270bp、360bp、380bp、400bp;
(3)對質(zhì)粒載體pFGC5941和pCAMBIA1300重組。重組質(zhì)粒pCADS1341用EcoRI/PstI酶切鑒定,能夠切出大小為3.5kb和8.9kb的兩條特異性的條帶,證明了適合馬鈴薯轉(zhuǎn)化的RNA干涉誘導(dǎo)載體構(gòu)建的正確性;
?。?)擴(kuò)增出的片段正反向兩次插入質(zhì)粒載體pCADS1341,經(jīng)酶切鑒定,得到3個R
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