一種侵染棉花黃萎病菌的雙鏈RNA病毒研究.pdf

1、棉花黃萎病是世界上棉花作物的難治性病害。研究侵染棉花黃萎病菌的病毒將對病毒-黃萎病菌-棉花的互作關系,以及對棉花黃萎病菌的防治具有較大的潛在意義。
　　 本文對采集自陜西三原、渭南和大荔三個地區(qū)的11株致病力不同的棉花黃萎病菌(Verticillium dahliae)菌株進行dsRNA檢測和分析。發(fā)現(xiàn)在弱致病力菌株0-21中有4條dsRNA條帶存在。
　　 采用經(jīng)改進的單引物擴增方法(M-SPAT法)獲得4條dsRNA

2、的全長cDNA克隆。DNA測序結果得到4條序列信息,根據(jù)片段大小依次命名為VcR1(3594 bp)、VcR2(3313 bp)、VcR3(2983bp)和VcR4(2932 bp)。核酸序列比對顯示4條序列的5'-UTR與3'-UTR具有高度相似性,含有一致的末端序列,分別為5'-UGAUAAAAAA-3'和5'-UUUACUACU-3'。編碼蛋白序列經(jīng)BLAST-P檢索結果顯示,VcR1-4編碼蛋白分別與Chrysovirus屬病毒

3、的依賴于RNA的RNA聚合酶(RdRp)、外殼蛋白(CP)、未知功能蛋白和OUT蛋白酶(OvarianTumor protease)有較高同源性。兩兩序列比對結果顯示:VcR1編碼蛋白(1108 aa,127.5 kDa)與Chrysovirus屬成員Cryphonectria nitschkei chrysovirus1(CnV-1)、Penicilliumchrysogenum virus(PcV)和Aspergillus fumi

4、gatus chrysovirus(AfuCV)編碼的RdRp相似性較高,含有真菌病毒RdRp中8個高度保守的motif;VcR2編碼蛋白(1016 aa,113.5 kDa)與CnV-1、AfuCV和PcV編碼的CP相似性較高,前560個氨基酸序列有多個保守序列區(qū)域;VcR3編碼蛋白(764 aa,84.1 kDa)與CnV-1-P4、AfuCV-P3和PcV-P3相似性較高,且與VcR1編碼蛋白有一定同源性;VcR4編碼蛋白(823

5、 aa,90.2 kDa)與CnV-1-P3、AfuCV-P4和PcV-P4相似性較高,并含有OUT蛋白的4個motif。系統(tǒng)進化樹分析顯示4條序列均與CnV-1、AfuCV和PcV具有較近的親緣關系。對比Chrysovirus屬成員基因組特征,從基因組結構、核酸序列和蛋白序列的比對及進化樹分析等結果推測,4條dsRNA為Chrysovirus屬的一種新病毒的基因組全序列。
　　 病毒粒子成球形,直徑大小約為35nm。從病毒粒子