血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)在高血糖所致大鼠氧化應(yīng)激損傷中的作用及其機(jī)制.pdf

1、本文對ACE2在高血糖所致大鼠氧化應(yīng)激損傷中的作用及其機(jī)制進(jìn)行了探討，研究主要包括以下三個(gè)部分:
　　 1 ACE2在高血糖致大鼠氧化應(yīng)激損傷中的作用研究
　　 通過建立大鼠氧化應(yīng)激損傷模型，探討血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)在機(jī)體氧化應(yīng)激損傷中的表達(dá)水平及作用。SD雄性成年大鼠30只，8只作為正常對照組，其余大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)造成大鼠持續(xù)高血糖，致機(jī)體氧化應(yīng)激損傷，成模后大鼠隨機(jī)分為2組:高血糖對照組和胰

2、島素治療組(3.7×10-8 mol/天)。30天后，所有大鼠斷頭處死，采集血清進(jìn)行如下試驗(yàn):(1)常規(guī)生化法測定大鼠血糖、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;(2)放射免疫分析法(RIA)測定血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)含量;(3)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血液中糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)、血管緊張素1-7(Ang1-7)含量及ACE2的酶活力。結(jié)果(1)高血糖對照組大鼠精神萎靡，表現(xiàn)多飲、多食和多尿。胰島素治療組大鼠逐

3、漸恢復(fù)正常，精神好轉(zhuǎn);(2)高血糖對照組大鼠血糖濃度穩(wěn)定處于高血糖狀態(tài)，均值為25.53±3.63 mmol·L-1;血清中MDA含量極顯著升高(P＜0.01)，SOD含量極顯著下降(P＜0.01);胰島素治療后，血糖水平逐漸下降，均值為13.01±1.84 mmol·L-1，MDA含量極顯著下降(P＜0.01)，SOD含量極顯著升高(P＜0.01);(3)高血糖對照組大鼠AngⅡ和AGEs含量均極顯著高于正常對照組(P＜0.01)，A

4、ng1-7含量和ACE2酶活力極顯著或顯著下降(P＜0.01/P＜0.05);胰島素治療后，AngⅡ和AGEs含量顯著或極顯著下降(P＜0.05/P＜0.01)，Ang1-7含量和ACE2酶活力均顯著升高(P＜0.05);(4)ACE2酶活力與血清中AGEs含量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.71，P＜0.01)，與SOD含量呈正相關(guān)(r=0.59，P＜0.05)。結(jié)論STZ致大鼠高血糖時(shí)，大鼠機(jī)體處于嚴(yán)重氧化應(yīng)激狀態(tài)。ACE2可能通過降解An

5、gⅡ，產(chǎn)生Ang1-7參與了高糖所致機(jī)體氧化應(yīng)激損傷的發(fā)生發(fā)展。
　　 2 ACE2在大鼠腎臟局部氧化應(yīng)激損傷中的表達(dá)差異及其作用
　　 本研究上一章的結(jié)果顯示ACE2對大鼠機(jī)體循環(huán)系統(tǒng)的氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。ACE2在腎臟高表達(dá)，高糖狀態(tài)下關(guān)于ACE2的研究基本集中于腎臟，故本章試圖探討ACE2在大鼠腎臟局部的氧化應(yīng)激損傷中的表達(dá)差異及其保護(hù)作用。大鼠氧化應(yīng)激模型的建立及動(dòng)物分組同上一章，30天后，所有大鼠斷頭處死

6、，采集尿液、采集腎臟組織并稱重，進(jìn)行如下試驗(yàn):(1)常規(guī)生化法測定大鼠尿糖和腎臟組織中MDA、SOD、過氧化氫酶(CAT)含量;(2)觀察腎臟病理組織學(xué)變化;(3) RIA法測定腎臟組織中AngⅡ含量;(4) Real time PCR法分析腎臟組織中ACE2的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果(1)與正常對照組相比，高血糖組大鼠尿糖和腎臟組織中MDA、AngⅡ含量極顯著升高(P＜0.01)，SOD和CAT含量極顯著或顯著下降(P＜0.01/P＜0

7、.05);胰島素治療后，大鼠尿糖含量極顯著下降(39.68±1.08 mmol·L-1VS3.23±0.76 mmol·L-1，P＜0.01)，腎臟組織中MDA和AngⅡ含量顯著下降(P＜0.05)，SOD含量顯著升高(P＜0.05)，CAT含量無明顯變化(P＞0.05)。(2)病理組織學(xué)觀察結(jié)果顯示:正常對照組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)正常;高血糖組大鼠出現(xiàn)腎小球腫脹，基底膜不規(guī)則增厚，系膜基質(zhì)彌漫性增生，腎組織損傷嚴(yán)重;胰島素治療后，損傷減輕;

8、(3)與正常對照組相比，高血糖組大鼠腎臟組織中ACE2的mRNA表達(dá)極顯著下調(diào)(P＜0.01);胰島素治療后ACE2的mRNA表達(dá)極顯著上調(diào)(P＜0.01)。結(jié)論 ACE2 mRNA表達(dá)下調(diào)，AngⅡ含量升高是高血糖致腎臟局部氧化應(yīng)激損傷的原因之一。ACE2是AngⅡ介導(dǎo)的腎臟氧化應(yīng)激的負(fù)向調(diào)節(jié)因子，在抵抗高血糖所致腎臟局部氧化應(yīng)激損傷的過程中發(fā)揮著積極的保護(hù)作用。
　　 3 ACE2對大鼠氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的機(jī)制初探

9、　　 本研究已證實(shí)ACE2參與了高血糖所致機(jī)體氧化應(yīng)激損傷的抗損傷過程，對機(jī)體循環(huán)系統(tǒng)及腎臟局部的氧化應(yīng)激損傷均具有保護(hù)作用。本章探討其對大鼠氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的可能機(jī)制。大鼠氧化應(yīng)激模型的建立及動(dòng)物分組同第一章，30天后，所有大鼠斷頭處死，采集腎臟組織進(jìn)行如下試驗(yàn):(1) RIA法測定腎臟組織中AngⅡ含量;(2) ELISA法測定腎臟組織中Ang1-7含量;(3) Real time PCR法分析腎臟組織中ACE、AT1、ACE

10、2及Mas的mRNA表達(dá)水平;(4)western blot法分析腎臟組織中ACE和ACE2的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果(1)與正常對照組相比，高血糖組大鼠腎臟組織中AngⅡ含量極顯著升高(P＜0.01)，Ang1-7含量下降，差異不顯著(P＞0.05)。胰島素治療后，大鼠腎臟組織中AngⅡ含量顯著下降(P＜0.05)，Ang1-7含量略有升高(P＞0.05);(2)與正常對照組相比，高血糖對照組大鼠腎臟組織中ACE mRNA和蛋白表達(dá)極顯著上

11、調(diào)(P＜0.01)，AT1 mRNA表達(dá)上調(diào)，差異不顯著(P＞0.05);ACE2 mRNA和蛋白表達(dá)均極顯著下調(diào)(P＜0.01)，Mas mRNA表達(dá)極顯著上調(diào)(P＜0.01)。胰島素治療后，腎臟組織中ACE mRNA和蛋白表達(dá)均極顯著下調(diào)(P＜0.01)，AT1 mRNA表達(dá)極顯著下調(diào)(P＜0.01);ACE2 mRNA表達(dá)極顯著上調(diào)(P＜0.01)，ACE2蛋白表達(dá)升高(P＞0.05)，Mas mRNA表達(dá)也極顯著上調(diào)(P＜0.0