SIRT1在豬卵巢顆粒細(xì)胞凋亡過程中的作用研究.pdf

1、卵泡閉鎖是雌性哺乳動(dòng)物卵巢內(nèi)普遍存在的生理現(xiàn)象，卵巢內(nèi)的卵泡除少數(shù)能成熟排卵外，大多數(shù)的卵泡在生長(zhǎng)發(fā)育過程中經(jīng)歷閉鎖退化。在母豬這樣的多胎動(dòng)物中，卵泡閉鎖調(diào)控影響其排卵率及產(chǎn)仔數(shù)，因此卵泡閉鎖調(diào)控的研究具有重要的生產(chǎn)意義及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。卵泡閉鎖是一個(gè)受內(nèi)分泌調(diào)控的極其復(fù)雜的生理過程;其主要機(jī)制是顆粒細(xì)胞凋亡。SIRT1(The Silent Information Regulator1)是組蛋白去乙酰化酶(HistoneDeacetylas

2、e，HDAC)第三類成員之一，廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞中，在基因沉默、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、脂肪酸代謝等諸多細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮作用;且SIRT1在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，其作用機(jī)理也正被一步步的報(bào)道闡述。根據(jù)國(guó)內(nèi)外的相關(guān)報(bào)道，本研究針對(duì)SIRT1在豬卵巢顆粒細(xì)胞凋亡中的作用進(jìn)行探討，為探索卵泡閉鎖調(diào)控機(jī)制的研究提供依據(jù)。
　　 本研究選用母豬卵巢作為試驗(yàn)材料，一方面利用免疫組織化學(xué)檢測(cè)SIRT1在母豬卵巢中的表達(dá);分別分析卵巢不同細(xì)胞、不同

3、發(fā)育階段卵泡及不同閉鎖程度卵泡中SIRT1的表達(dá);并用熒光定量法檢測(cè)不同發(fā)育階段及不同閉鎖程度的卵泡中SIRT1的表達(dá)情況。另一方面利用體外培養(yǎng)豬卵巢顆粒細(xì)胞，分別用SIRT1的激活劑(RES)、抑制劑（NAM）處理培養(yǎng)的豬卵巢顆粒細(xì)胞，不含血清的培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同處理組的細(xì)胞凋亡情況;用MTT法檢測(cè)不同處理組的細(xì)胞增殖情況。
　　 本論文研究結(jié)果及結(jié)論如下:
　　 SIRT1在豬卵巢卵母細(xì)胞、顆粒

4、細(xì)胞、膜細(xì)胞、黃體細(xì)胞中均檢測(cè)到表達(dá)，其中顆粒細(xì)胞中的表達(dá)豐度顯著高于膜細(xì)胞;部分黃體細(xì)胞中檢測(cè)到SIRT1的表達(dá);在間質(zhì)細(xì)胞中幾乎不表達(dá);且SIRT1在卵巢組織細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位為細(xì)胞核。
　　 SIRT1在豬卵巢不同發(fā)育階段卵泡中的表達(dá)呈現(xiàn)差異性;在3～1.5mm卵泡中的表達(dá)量最高，隨著卵泡的繼續(xù)發(fā)育表達(dá)量下降;并且在閉鎖卵泡中的表達(dá)高于健康卵泡，暗示SIRT1在顆粒細(xì)胞凋亡中起重要作用。
　　 用體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞進(jìn)