抗Bt Cry1Ac粉紋夜蛾離體細胞與敏感細胞的差異蛋白定量分析.pdf

1、上世紀五十年代以來，蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)殺蟲劑因毒力高、殺蟲快、不殺天敵和有益微生物、不破壞生態(tài)平衡、具有適應(yīng)大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)、低成本等優(yōu)點，蘇云金芽孢桿菌已成為世界上應(yīng)用最廣泛的微生物殺蟲劑。然而，隨著蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑長期大量使用，發(fā)現(xiàn)全世界范圍內(nèi)多種昆蟲都對其產(chǎn)生了抗性，這些抗性均呈現(xiàn)遞增的趨勢。因此闡明抗性形成和發(fā)展規(guī)律揭示抗性的分子機制是治理好昆蟲對Bt抗性的關(guān)鍵問題。

2、本實驗室長期致力于這方面的研究，尤其是針對粉紋夜蛾BTI-Tn-5B1-4細胞對CrylAc毒素產(chǎn)生高水平抗性的機理做了大量的研究工作，并從蛋白質(zhì)組水平探討抗性產(chǎn)生的分子機制，采用雙向電泳技術(shù)分離了敏感和抗性兩種細胞的總蛋白和總膜蛋白，銀染顯色，Melanie ViewerⅡ軟件分析，獲得了一些差異蛋白質(zhì)，對部分差異蛋白質(zhì)點測定了肽質(zhì)量指紋圖譜(peptide mass fingerprint，簡稱PMF)并查詢了蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫。經(jīng)數(shù)據(jù)庫

3、查詢，初步鑒定差異蛋白質(zhì)為一些與胞質(zhì)外周蛋白，脂多糖生物合成蛋白和免疫球蛋白重鏈等具同源性的蛋白質(zhì)。 在前人工作如毒力測定、抗性篩選和穩(wěn)定以及在轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組水平研究了敏感與抗性兩種細胞的基因差異表達，并初步鑒定了一些差異表達基因或差異蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)上，本實驗采用雙向電泳技術(shù)分離了敏感和抗性兩種細胞的總蛋白，銀染顯色，ImageMaster 2D Platinum 6.0軟件分析，統(tǒng)計了凝膠上所有的差異蛋白點，并初步分析量的差異

4、。分別以粉紋夜蛾細胞BTI-Tn-581-4細胞總蛋白雙向電泳圖譜和粉紋夜蛾抗CrylAC的BTI-Tn-581-4細胞總蛋白雙向電泳圖譜為參照，在抗性細胞的2-DE總蛋白圖譜上檢測到的差異點有209個，其中表達量上調(diào)2-3倍的有17個，表達量上調(diào)3倍以上的有18個，這里面表達量上調(diào)5倍以上的有4個；表達量下調(diào)2-3倍的有13個，下調(diào)3倍以上的有7個，其余各點均為Hi5圖上有而L123圖上消失的點；在敏感細胞的總蛋白2-DE圖譜上檢測到