遼寧新品系絨山羊角蛋白家族基因的表達(dá)研究.pdf

1、角蛋白家族基因主要包括角蛋白及角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白兩大類基因，是羊絨的主要結(jié)構(gòu)蛋白，與羊絨的優(yōu)良品質(zhì)密切相關(guān)。據(jù)相關(guān)研究證實(shí)，BMP信號(hào)通路是與毛囊生長(zhǎng)相關(guān)的信號(hào)通路之一，能夠間接調(diào)控毛囊生長(zhǎng)，進(jìn)而影響毛發(fā)類型及絨毛的直徑。
　　為了進(jìn)一步研究角蛋白家族基因與羊絨的粗細(xì)度之間的關(guān)系，以及角蛋白家族基因與BMP介導(dǎo)的信號(hào)通路之間是否存在聯(lián)系，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)K26、KAP26.1、KAP6.2、KAP7.1以及KAP8.2基

2、因分別在興盛期、退行期、休止期在毛囊中的表達(dá)量。利用半定量RT-PCR技術(shù)對(duì)上述5個(gè)基因在毛囊退行期皮膚組織、耳組織及毛囊生長(zhǎng)期皮膚細(xì)胞中的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。利用RNA干擾技術(shù)，構(gòu)建BMP信號(hào)通路抑制劑Noggin基因的慢病毒干擾載體，有效敲減羊皮膚細(xì)胞中Noggin基因，再次利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)相關(guān)角蛋白家族基因的表達(dá)情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)熒光定量PCR結(jié)果顯示:在毛囊興盛期，KAP7.1、KAP8.2、KAP

3、26.1及K26在次級(jí)毛囊中的表達(dá)量均高于初級(jí)毛囊(p＜0.01);進(jìn)入毛囊退行期，這四個(gè)基因在初級(jí)毛囊中的表達(dá)量反而高于次級(jí)毛囊，其中KAP8.2的表達(dá)差異顯著（p＜0.05)，KAP26.1及K26的表達(dá)差異極顯著（p＜0.01)。而KAP6.2基因在初次級(jí)毛囊中的表達(dá)趨勢(shì)與上述四個(gè)基因恰好相反。在毛囊休止期，皮膚中K26及KAP26.1基因的相對(duì)表達(dá)量較退行期時(shí)明顯減少，其余3個(gè)基因與退行期時(shí)相似。(2)半定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4、顯示，這5個(gè)基因在退行期皮膚、耳組織以及毛囊生長(zhǎng)期皮膚細(xì)胞中的表達(dá)情況各不相同。KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP26.1這四個(gè)基因在上述組織中均表達(dá)，但表達(dá)量上存在差異。而K26基因僅在毛囊生長(zhǎng)期皮膚細(xì)胞中有少量的表達(dá)。(3) RNA干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果:構(gòu)建了特異性干擾Noggin基因的慢病毒干擾載體;抑制Noggin基因的表達(dá)后，對(duì)相關(guān)角蛋白家族基因的表達(dá)進(jìn)行了熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，除KAP8.2基因外，KAP6.2、KA

5、P7.1、K26及KAP11.1的相對(duì)表達(dá)量均呈下降趨勢(shì)。
　　由以上結(jié)果我們可以得出以下結(jié)論:1）KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、K26及KAP26.1在絨毛形成的不同時(shí)期在初、次級(jí)毛囊中及不同組織中的表達(dá)量是不同的，由此可以推斷這些基因可能對(duì)絨毛生長(zhǎng)的粗細(xì)度及毛囊的周期性變化有重要的調(diào)控作用。2）干擾Noggin基因的表達(dá)能夠抑制相關(guān)角蛋白家族基因的表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)為今后繼續(xù)研究BMP信號(hào)通路與角蛋白家族基因的聯(lián)系提供