遼寧新品系絨山羊新基因GMPR2生物學(xué)功能研究及K26抗體制備.pdf

1、遼寧新品系絨山羊是我國特有的遺傳資源，其山羊絨有著十分重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此研究遼寧新品系絨山羊與經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)基因的功能就顯得尤為重要。
　　本文旨在研究遼寧新品系絨山羊GMPR2新基因在皮膚中的功能及與絨毛生長(zhǎng)的關(guān)系。首先對(duì)該基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，再利用地高辛標(biāo)記的原位雜交技術(shù)對(duì)其進(jìn)行定位研究，然后利用熒光定量技術(shù)對(duì)其進(jìn)行相對(duì)定量分析，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)GMPR2基因是否在其它器官中表達(dá)，最后驗(yàn)證不同濃度、不同時(shí)間褪黑激素處

2、理是否影響該基因的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)證明:GMPR2可能間接調(diào)節(jié)初次級(jí)毛囊的生長(zhǎng)萎縮。另外，因遼寧新品系絨山羊絨毛纖維的形成主要與微絲角蛋白(KIFs，K)的表達(dá)有關(guān)，為研究K26基因表達(dá)蛋白的表達(dá)量和表達(dá)位置，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建BL21-pET32a-K26表達(dá)載體，提取重組蛋白后將其免疫到新西蘭雄兔中，制作兔抗K26基因抗體，為后續(xù)研究工作奠定基礎(chǔ)。重要結(jié)果如下:
　　(1)經(jīng)ORF Finder與Blast比對(duì)，確定得到的基因全長(zhǎng)為GMPR

3、2基因，其與牛GMPR2同源性最高。結(jié)構(gòu)域分析顯示，遼寧新品系絨山羊GMPR2含有一個(gè)與IMPDH相似的TIM管結(jié)構(gòu)保守位點(diǎn)，該位點(diǎn)具有氧化還原活性，屬于IMPDH/GMPR酶家族。
　　(2)基因定位分析顯示GMPR2基因在初、次級(jí)毛囊中都有表達(dá)，表達(dá)部位為初、次級(jí)毛囊的內(nèi)根鞘。
　　(3)基因定量分析顯示GMPR2基因在退行期初級(jí)毛囊中的表達(dá)量約為次級(jí)毛囊的5.45倍，差異顯著(P＜0.01)，在興盛期與休止期表達(dá)量相差

4、不明顯;
　　(4)另外，GMPR2基因只在皮膚中表達(dá)，在心、肝、腎、肺、脾內(nèi)臟器官中未發(fā)現(xiàn)該基因表達(dá);
　　(5)用不同濃度（0.02g/L、0.2g/L、1g/L）、不同時(shí)間(24h、48h、72h)的褪黑激素處理遼寧新品系絨山羊興盛期培養(yǎng)的皮膚細(xì)胞后，GMPR2基因的表達(dá)量都有明顯的降低。其中，褪黑激素濃度為0.2 g/L，處理48 h，GMPR2基因的表達(dá)量降低最為明顯(P＜0.01）。
　　(6)通過ELIS