基于蚓糞菌群的土傳病害拮抗菌篩選與復(fù)合菌劑研制.pdf

1、隨著種植面積和年限的逐年增加，作物連作障礙問題已成為我國設(shè)施農(nóng)業(yè)發(fā)展的限制因素之一。已有研究表明，作為有機(jī)廢棄物生物消解產(chǎn)物，蚯蚓糞可以改善土壤理化性質(zhì)、調(diào)節(jié)土壤微生物生態(tài)，能有效解除作物連作障礙，這些功能的實(shí)現(xiàn)可能與蚯蚓糞微生物群落特征密切有關(guān)。開展蚯蚓糞微生物群落特征研究，篩選并利用蚯蚓糞有益微生物，對(duì)于拓展蚯蚓糞的土壤生態(tài)調(diào)節(jié)功能具有重要意義。本文初步研究了蚯蚓糞微生物群落多樣性特性，從蚯蚓糞及園土中篩選獲得若干具有廣譜拮抗和體外

2、促生活性菌株，并進(jìn)行了分子鑒定，同時(shí)，在分析了菌株間的相容性，以及優(yōu)化菌株混合發(fā)酵條件的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了細(xì)菌及放線菌兩類混合菌劑，并初步應(yīng)用于黃瓜連作栽培試驗(yàn)。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)以牛糞、豬糞和污泥等常見有機(jī)廢棄物作為蚯蚓餌料，利用細(xì)菌16SrDNA V3區(qū)特異擴(kuò)增及變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)技術(shù)，比較了不同餌料及餌料改變對(duì)蚯蚓糞細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性的影響。結(jié)果表明:與所取食的餌料相比，蚯蚓糞細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性均有

3、不同程度的下降，蚯蚓糞與對(duì)應(yīng)餌料之間細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似性范圍為15.3％～37.7％;來自不同餌料的蚯蚓糞細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似性范圍為17.2％～39.1％，其中以牛糞和豬糞為餌料時(shí)，蚯蚓糞細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似性最高，與對(duì)應(yīng)的餌料細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似性相比，提高了近1倍;當(dāng)餌料由豬糞改為牛糞后，隨著時(shí)間延長，蚯蚓糞細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性逐漸下降并趨于穩(wěn)定，并且蚯蚓糞與餌料牛糞的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似性由0d的33.2％逐漸下降到21 d的14.8％并趨于穩(wěn)定。

4、由此可知，餌料的種類及轉(zhuǎn)換可以影響蚯蚓糞細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性。
　　(2)利用對(duì)峙平板試驗(yàn)從蚯蚓糞和園土中篩選得到對(duì)黃瓜枯萎病菌(Fusarisum oxysporumf)，黃瓜立枯病菌（Rhizoctonia solaniKühn）、小麥根腐病菌（Cochliobolus sativu）和西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporiumf)具有拮抗作用的細(xì)菌及放線菌22株，其中12個(gè)菌株對(duì)上述病原菌具有較好的及廣譜的拮抗作用，

5、同時(shí)還具有不同程度的體外促生能力。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征和16S rRNA序列分析對(duì)比發(fā)現(xiàn):8株細(xì)菌均為芽孢桿菌屬（Bacillus），4株放線菌均為鏈霉菌屬（Streptomyces）。
　　(3)對(duì)供試菌株生長的相容性、適宜pH值范圍及培養(yǎng)基的研究結(jié)果表明:8株細(xì)菌之間及4株放線菌之間均具有良好的相容性;8株細(xì)菌和4株放線菌培養(yǎng)適宜pH值范圍均為6～8;對(duì)混合菌劑培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化，提高了拮抗和促生活性。
　　(4)利用平板培養(yǎng)

6、法和PCR-DGGE法，研究了細(xì)菌及放線菌兩種復(fù)合菌劑灌根處理對(duì)連作黃瓜根際土壤微生物數(shù)量及多樣性的影響。結(jié)果表明:在不同的施肥條件下，細(xì)菌菌劑和放線菌菌劑處理能不同程度地提高黃瓜根際土壤中細(xì)菌和放線菌數(shù)量，降低真菌數(shù)量，同時(shí)普遍提高了根際土壤細(xì)菌與真菌及放線菌數(shù)量的比值。細(xì)菌菌劑對(duì)根際細(xì)菌的促進(jìn)作用在不施肥及復(fù)合肥+有機(jī)肥背景下表現(xiàn)突出，而放線菌劑的促進(jìn)作用在復(fù)合肥+微生物肥及復(fù)合肥背景下表現(xiàn)突出。兩種菌劑對(duì)根際微生物的比例及細(xì)菌群落