食用菌種植中污染菌青霉的拮抗菌篩選與應(yīng)用研究.pdf

1、我國是食用菌生產(chǎn)大國，目前年產(chǎn)量約在900萬噸左右，占世界總產(chǎn)量的65％以上。金堂縣是我國三大食用菌生產(chǎn)基地之一，目前種類主要有蘑菇、香菇、平菇、木耳、金針菇、姬菇、杏鮑菇等20多個品種。年產(chǎn)量超過40萬噸(鮮品)，年產(chǎn)值達(dá)到14億元。趙家鎮(zhèn)是金堂縣食用菌生產(chǎn)的重鎮(zhèn)，其食用菌產(chǎn)值已超過了糧食生產(chǎn)的總產(chǎn)值。產(chǎn)品除供應(yīng)國內(nèi)市場外，還銷到東南亞以及歐美各國，因此在國際國內(nèi)都有較大的影響。這樣的食用菌生產(chǎn)基地，近年出現(xiàn)了嚴(yán)重的污染菌(包括病毒)

2、，有些菇農(nóng)種植的食用菌其污染率超過了50％以上，全縣的食用菌生產(chǎn)因污染菌造成的損失達(dá)億元以上，到了必須認(rèn)真防治的時候。 目前，國際國內(nèi)防治食用菌生產(chǎn)中的污染方法主要有：一是高溫滅菌法，即對原料在接種前進(jìn)行加熱處理；二是使用滅菌制劑(主要為化學(xué)制劑)。由于化學(xué)制劑(如：敵敵畏，馬拉硫磷，樂果，對二氯苯，甲醛等)一般都有殘留毒物，故而直接影響到食用菌的質(zhì)量，影響到出口換匯，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。因此尋求一種新的安全有效的防治途徑迫在

3、眉睫。利用自然環(huán)境中的拮抗微生物防止病菌的侵襲，也就是我們說的生物防治，這樣不僅可以避免由化學(xué)農(nóng)藥引起的殘留問題而且對環(huán)境和人類健康都是安全的。 通過對金堂縣食用菌生產(chǎn)基地的污染菌袋采樣分析，污染菌主要有真菌、細(xì)菌、放線菌和病毒類，蟲害主要為菌蠅，螨類等，所謂病害多為上述病菌引發(fā)。其中最為嚴(yán)重的是一種青霉菌，經(jīng)分析鑒定是產(chǎn)黃青霉(P.chrysogenum)。本研究即針對該青霉污染菌，從實驗室保藏菌種中篩選出相關(guān)拮抗菌，制備出拮

4、抗制劑，進(jìn)行小型田間實驗，檢測其生物防治效果。通過2次轉(zhuǎn)接將實驗室保藏菌種活化備用，配置不同濃度梯度的污染菌菌懸液，采用直接堆砌法進(jìn)行產(chǎn)黃青霉拮抗菌的篩選。直接堆砌法所獲得的抑菌圈大而清晰。經(jīng)過篩選得到了一株拮抗效果最佳的拮抗菌株12<'＃>，在其周圍青霉不能生長，有一明顯的抑菌圈。對拮抗菌株12<'＃>進(jìn)行形態(tài)特征、培養(yǎng)特性以及一系列生理生化實驗鑒定，12<'＃>菌株為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus Frankland&

5、 Frankland)。 篩選到的拮抗菌經(jīng)鑒定后，對其抑菌機(jī)制作了初步測定。將不同時段的發(fā)酵液經(jīng)過濾、離心去掉菌體，留取上清液進(jìn)行抑菌實驗。實驗結(jié)果表明：有效抑菌成分是菌體代謝物，且該代謝物隨著發(fā)酵時間的推移，濃度逐漸增高，在發(fā)酵60h左右達(dá)到最好抑菌效果，抑菌時間持久。 通過對拮抗菌制劑的安全性檢測表明：該制劑對食用菌菌絲體生長無影響，具有很好的安全性。與常見滅菌劑甲醛、百菌清、阿維菌素抑菌效果相比較，12<'＃>拮抗

6、菌株發(fā)酵上清液的抑菌效果不但明顯，且持續(xù)時間長。在培養(yǎng)9d之后抑菌圈仍達(dá)到40mm以上，且發(fā)酵液濃度越高，抑菌效果越顯著。通過比較實驗可以看出，12<'＃>菌株的拮抗效果明顯好于百菌清、甲醛和阿維菌素。 將制備好的拮抗菌制劑用于成都金堂縣食用菌生產(chǎn)基地，分別對平菇、金針菇、杏鮑菇和姬菇這4種食用菌菌袋上的污染菌菌斑作防治實踐。選取上述4種食用菌的污染菌袋各一批；按每1cm<'2>病斑用1ml制劑的比例對污染菌袋進(jìn)行注射或噴霧，施