六株家蠶病原菌的分類鑒定及其致病力的初步研究.pdf

1、蠶病為害是養(yǎng)蠶生產(chǎn)上主要的不穩(wěn)定因素,直接影響?zhàn)B蠶的收成、蠶繭的產(chǎn)量及繭絲的品質(zhì)。蠶病種類較多,通常按致病的原因可分傳染性和非傳染性兩大類。傳染性蠶病由細(xì)菌、真菌、病毒和原蟲等病原微生物引起。
　　家蠶細(xì)菌病是常見的蠶病,一般春蠶少,夏秋蠶高溫多濕季節(jié)發(fā)生較多。其種類較多,大多由于寄生細(xì)菌的迅速繁殖,蠶尸隨之軟化腐爛,故通稱為軟化病。根據(jù)其病原及病癥,可分為卒倒病、敗血病、細(xì)菌性腸道病等。
　　家蠶真菌病是由病原菌經(jīng)皮侵入蠶

2、體而引起的,除曲霉病外,家蠶發(fā)病斃死后,尸體有硬化現(xiàn)象,因此真菌病習(xí)慣上叫硬化病或僵病,在多濕地區(qū)和多濕季節(jié)發(fā)病較多。家蠶真菌病種類很多,其中以白僵病、黃僵病的危害最為嚴(yán)重。由于黃僵菌和球孢白僵菌在形態(tài)上的差異極小,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為黃僵菌與球孢白僵菌(Beauveria bassiana)同屬同種,只是血清型不同,但并不明確[1]。
　　本研究從自然發(fā)生的病蠶中分離獲得4株病原細(xì)菌(分別暫命名為SY-1、ZJ-1、ZJ-2和DT-1)

3、,對(duì)各菌株的形態(tài)、生理生化特征和分子指標(biāo)進(jìn)行鑒定,確定其具體的屬和種。
　　細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:4株病原細(xì)菌均為革蘭氏陰性菌,細(xì)胞呈短桿狀,直形,兩端鈍圓,周身鞭毛,能運(yùn)動(dòng)。但菌落形態(tài)、生理生化指標(biāo)等差異顯著。16SrRNA基因序列分析及生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:SY-1為一株雷氏普羅威登斯菌,這是首次發(fā)現(xiàn)該菌能引起家蠶患敗血病的案例;ZJ-1和ZJ-2與黏質(zhì)沙雷氏菌相似性均達(dá)99％以上,通過(guò)48h相同條件下常規(guī)培養(yǎng),隨著培養(yǎng)溫度(2

4、5℃、30℃、37℃)的升高,ZJ-2菌株菌落的顏色始終較ZJ-1菌株菌落紅色深,ZJ-2菌株在37℃還表現(xiàn)出一定程度的紅色,而ZJ-1菌株在37℃時(shí)幾乎看不到紅色,說(shuō)明溫度對(duì)這2株菌株靈紅素的產(chǎn)生都有影響,但不同菌株之間受影響的程度不同。除此之外,二者典型生理生化現(xiàn)象也有諸多不同,如ZJ-2能夠利用丙二酸鹽,檸檬酸鹽利用現(xiàn)象為產(chǎn)酸、V-P反應(yīng)陰性等。最終確定ZJ-1為一株黏質(zhì)沙雷氏菌的分離株,ZJ-2為一株新的黏質(zhì)沙雷氏菌亞種;DT-

5、1經(jīng)鑒定也為一株沙雷氏菌屬的分離菌株,但不產(chǎn)生紅色素,排除是黏質(zhì)沙雷氏菌的可能性。以上三株菌株對(duì)家蠶的致病力不同,具體表現(xiàn)為ZJ-2>DT-1>ZJ-1。這三株細(xì)菌的鑒定證明了黏質(zhì)沙雷氏菌不是沙雷氏菌屬唯一的昆蟲致病菌,證明不同的黏質(zhì)沙雷氏菌菌株產(chǎn)生色素的能力有差異,為高色素產(chǎn)量菌株的選育及對(duì)該色素開發(fā)利用奠定基礎(chǔ),同時(shí)也表明感染家蠶患敗血病的沙雷氏菌具有多樣性。
　　本研究從自然發(fā)生的患黃僵病病蠶中分離獲得2株黃僵病病原菌(分別

6、暫命名為STH2、STH3),通過(guò)形態(tài)、生理學(xué)和分子生物學(xué)等多個(gè)方面與球孢白僵菌株SHB進(jìn)行比對(duì),以確定它們是否為同屬同種病原真菌。
　　STH2和STH3與SHB比對(duì)結(jié)果表明:孢子顏色不同,產(chǎn)孢量差異極顯著。但孢子大小基本一致,菌絲生長(zhǎng)速率基本相同,18S、28S,核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS序列相似性近乎100%,因此,在分子生物學(xué)水平,可認(rèn)定二者為同屬同種。
　　本文從形態(tài)、生理生化、分子生物學(xué)角度全面分析鑒定了4株家蠶病