贊皇大棗黑腐病病原菌的鑒定及致病機理研究.pdf

1、本文針對近年來在贊皇大棗上發(fā)生嚴重的黑腐病，進行優(yōu)勢病原菌的分離鑒定，并從細胞壁降解酶(CWDEs)的產(chǎn)生、膜透性的改變、活性氧清除酶及防御酶系統(tǒng)的啟動、毒素的產(chǎn)生等幾個方面，研究其致病機理。結(jié)果如下：
　　1.病原菌的分離和鑒定：通過組織塊分離法和柯赫氏法則回接證病，獲得了引起該病的優(yōu)勢病原菌菌株ZHB-SX-2013和ZDJ-SX-2013；采用形態(tài)學與ITS rDNA分子鑒定相結(jié)合的方法，對其進行分類鑒定。結(jié)果表明：菌株ZH

2、B-SX-2013為細極鏈格孢菌(Alternaria tenuissima)，菌株 ZDJ-SX-2013為頭狀莖點霉菌(Phoma glomerata)。
　　2.黑腐病菌CWDEs活性的研究：體外誘導和回接贊皇大棗培養(yǎng)后，在不同培養(yǎng)天數(shù)對CWDEs取樣測定并比較分析活性變化。結(jié)果表明：A.tenuissima和P.glomerata均能通過產(chǎn)生角質(zhì)酶和細胞壁降解酶的方式侵染贊皇大棗。其中角質(zhì)酶主要在侵染前期起作用，降解植物細

3、胞壁的角質(zhì)層利于進一步入侵；細胞壁降解酶中起主要作用的是多聚半乳糖醛酸酶(PG)、聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)和羧甲基纖維素酶(Cx)。PG、PMG在侵染前期降解細胞壁中的果膠質(zhì)使果實軟化，Cx在侵染中期降解細胞壁中的纖維素使細胞壁結(jié)構(gòu)破壞，三者結(jié)合達到降解植物細胞壁的作用，但2株病原菌Cx的出現(xiàn)高峰略有差異。多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)和果膠甲基反式消除酶(PMTE)在此過程中作用不明顯。
　　3.黑腐病菌侵染對果皮細胞

4、膜透性的影響：病原菌接種贊皇大棗后，通過測定果皮組織的相對電導率、丙二醛(MDA)和脂氧合酶(LOX)的含量發(fā)現(xiàn)， A.tenuissima和P.glomerata侵染均可使果皮相對電導率升高，同時MDA和LOX的含量也相應增加，且P. glomerata接種后LOX最終活力高于A.tenuissima接種處理。說明黑腐病菌侵染可使棗果細胞膜透性增加，膜質(zhì)過氧化程度升高，且加快了不飽和脂肪酸分解，最終破壞并影響了細胞膜的結(jié)構(gòu)和正常功能。

5、
　　4.黑腐病菌侵染對活性氧清除酶和防御酶系統(tǒng)的影響：A.tenuissima和 P. glomerata侵染初期，均可導致活性氧清除酶系統(tǒng)中超氧化物歧化酶(SOD)和抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性的升高，但隨時間延長活性又急劇下降，可見2株病菌的侵染可激活此兩種活性氧清除酶，避免病菌侵染初期活性氧在果實內(nèi)大量積累，但隨后活性氧清除系統(tǒng)逐漸遭到破壞，病害擴展蔓延加速；過氧化氫酶(CAT)活性總體上低于對照，可能是由于病原菌的侵

6、染使該酶的活力喪失或者其在清除過氧化氫的反應中作用不明顯。防御酶系統(tǒng)的苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量在2株病原菌侵染后明顯升高，可使植物組織木質(zhì)化程度加深，從而抵御病原菌的入侵；而過氧化物酶(POD)活性除在P. glomerata初侵染時略有升高外，其余時間均低于對照，說明其在黑腐病菌侵染過程中可能不是主要的防御酶因子。
　　5.黑腐病菌毒素的產(chǎn)生：毒素粗提物生物活性測定和產(chǎn)生條件研究表明，毒素是A.tenuissima和P. g