生姜莖基腐病病原菌的鑒定與防治.pdf

1、生姜莖基腐病是典型的土傳病害和種子傳播病害，目前對生姜莖基腐病的防治主要基于化學(xué)農(nóng)藥和肥料，開發(fā)替代型的環(huán)境友好型藥劑勢在必行。山東省生姜栽培由來已久，近年來隨著生姜種植面積的不斷擴大，生姜病害的發(fā)生也呈現(xiàn)上升趨勢，尤其是生姜莖基腐病的發(fā)生尤為嚴重，給姜農(nóng)帶來巨大的經(jīng)濟損失，目前已成為生姜生產(chǎn)中的主要問題之一。本實驗通過采集病樣，在形態(tài)學(xué)觀察、致病性測定及序列分析的基礎(chǔ)上，對生姜莖基腐病病原菌進行研究。通過室內(nèi)藥劑篩選和田間生物防治實驗

2、，以期為生姜莖基腐病的防治提供可靠的理論依據(jù)。
　　本實驗主要研究內(nèi)容如下：
　　1、從山東省安丘生姜種植基地的不同發(fā)病地區(qū)，采集生姜莖基腐病病株60余株。分離純化后，得到的病原菌腐霉菌株通過致病性測定符合Koch法則。通過形態(tài)學(xué)觀察和rDNA-ITS序列分析得到三種不同的病原菌腐霉，分別是刺腐霉（Pythium spinosum）、群結(jié)腐霉（P. myriotylum）、林棲腐霉（P. sylvaticum）。
　　

3、2、采用菌絲生長速率法和活體組織法測定了甲殼胺對P. myriotylum、P. spinosum、P. sylvaticum的抑制作用，結(jié)果得到甲殼胺對3種腐霉均有抑制作用，抑制中濃度（EC50）分別為422.7112 mg/L、401.6995 mg/L、446.9107 mg/L。活體組織實驗結(jié)果表明，甲殼胺可有效抑制生姜莖基腐病的生長。
　　3、采用顯微觀察照相技術(shù)觀察甲殼胺處理后的腐霉菌絲形態(tài)的變化。觀察顯示甲殼胺處理后

4、的菌絲膨大、扭曲，分枝增多，菌絲內(nèi)部出現(xiàn)空泡化。
　　4、采用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)比較用甲殼胺處理的群結(jié)腐霉病原菌菌和對照組的表達差異。對差異表達的基因進行了統(tǒng)計分析，結(jié)果共獲得了770個差異表達基因，其中有237個上調(diào)基因，533個下調(diào)基因。將差異表達基因與GO數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫進行比對注釋，經(jīng)功能富集后發(fā)現(xiàn)，一些涉及跨膜運輸有關(guān)的基因以及一些與跨膜運輸有關(guān)的酶的活動發(fā)生改變。
　　5、采用常規(guī)土樣分離法對生姜不同發(fā)病地中的

5、腐霉含量進行了測定。對安丘和昌邑發(fā)生生姜莖基腐病不同程度的地塊進行土壤含菌量測定。測定結(jié)果是不發(fā)病地塊每克土壤含菌量1-100個，重病地塊每克土壤含菌量800-2500個。結(jié)果表明腐霉含菌量越高，生姜莖基腐病發(fā)病越重。
　　6、本研究采用菌絲生長速率法測定了10種植物精油對腐霉的抑菌活性，從中篩選出4種具有廣譜抗菌活性的植物精油，分別是月桂精油、肉桂精油、天竺葵精油和丁香酚精油。丁香酚對供試腐霉表現(xiàn)出較高的生物活性，精油濃度在50