甘蔗梢腐病病原菌的營養(yǎng)體親和性研究.pdf

1、甘蔗梢腐病是由串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme）引起的，是甘蔗生長的一種主要病害，危害所有甘蔗生產(chǎn)國家與地區(qū)的甘蔗生產(chǎn)。近年來，甘蔗梢腐病在我國廣大蔗區(qū)呈現(xiàn)出逐漸加重的趨勢，在中國已鑒定出三個(gè)病原種(F.verticillioides，F(xiàn).proliferatum和F.oxysporum)。為了解甘蔗梢腐病的病原菌分化和多樣性，本文利用種特異分子標(biāo)記基因的PCR擴(kuò)增對所收集的115個(gè)甘蔗梢腐病病原菌菌株進(jìn)行遺傳多樣性

2、分析，同時(shí)運(yùn)用營養(yǎng)體親和技術(shù)研究甘蔗梢腐病病原菌的不同地理與寄主品種來源、生理小種以及T-DNA插入突變體與VCGs的關(guān)系，以其進(jìn)一步探討甘蔗梢腐病病原菌的群體結(jié)構(gòu)、種內(nèi)分化以及病害流行。結(jié)果表明:
　　通過聚類分析可將115個(gè)菌株劃分為7個(gè)遺傳類群，其中來源于廣西和福建龍文的大部分菌株分布在遺傳類群1中，福建福州的菌株全都被劃分在遺傳類群3，9個(gè)個(gè)F.proliferaturn屬于遺傳類群4，云南的菌株幾乎自成一類，分布在遺傳類

3、群5、6、7。由此可見，甘蔗梢腐病病原菌的遺傳多樣性非常豐富，可能與采集地的自然地理?xiàng)l件有關(guān)，如同屬福建的福州和龍文的分離物分布在不同的類群，云南由于自身的高原生態(tài)條件差異很大，導(dǎo)致病原菌的分布與低海拔的廣西、福建明顯不同。
　　甘蔗梢腐病病原菌經(jīng)氯酸鉀誘導(dǎo)突變，形成不同形狀的角變區(qū)，大部分為扇形角變區(qū)，鑒定為Nit突變體;而形成不規(guī)則角變區(qū)或以整個(gè)菌落出現(xiàn)的角變區(qū)幾乎都不是Nit突變體。Nit突變體表型鑒定發(fā)現(xiàn)，甘蔗梢腐病病原菌

4、獲得Nit1突變體比較多，占總突變體數(shù)的80％以上，而獲得NitM突變體的菌株較少。根據(jù)營養(yǎng)體親和性(VCGs)測定結(jié)果顯示，甘蔗梢腐病菌株中只有YN49與YN56兩個(gè)菌株發(fā)生營養(yǎng)體親和反應(yīng)，其他菌株之間均未親和，因此，將YN49與YN56劃分為VCG10，而其他菌株各自為一個(gè)VCG。說明甘蔗梢腐病病原菌的VCGs與地理來源、寄主品種等沒有明顯相關(guān)性。
　　利用農(nóng)桿菌T-DNA轉(zhuǎn)化法，產(chǎn)生667個(gè)CNO-1的突變體。對其致病性進(jìn)行

5、測定結(jié)果表明，突變菌株的致病性主要集中分布在2～3級，其中原始菌株CNO-1病斑擴(kuò)展長度為19.25mm，發(fā)病等級為3級;沒有突變菌株完全不發(fā)病;發(fā)病等級為1級的突變菌株有3株，即636B、41-1和41-2，致病性明顯減弱;發(fā)病等級為5級的有5個(gè)菌株，即280、43-1、14、295和283，致病性顯著增強(qiáng)。從發(fā)病指數(shù)分析看出，清水對照的發(fā)病指數(shù)為0，原始菌株的發(fā)病指數(shù)為70％，發(fā)病指數(shù)在80％以上的有8個(gè)菌株，菌株280甚至達(dá)到了1

6、00％;發(fā)病指數(shù)在30％以下的只有3個(gè)菌株，41-1和41-2甚至只有20％。由CNO-1構(gòu)建的突變體獲得的Nit1突變體也比較多，占60％左右，大部分突變菌株都可以獲得NitM突變體，并且占到總突變體數(shù)的20％左右。NitM突變體間親和力較強(qiáng)，均能與自身菌株Nit1、Nit3突變體發(fā)生親和反應(yīng);只有一株致病性增強(qiáng)的菌株280與其他菌株互不親和。本研究結(jié)果將有助于研究甘蔗梢腐病病原菌的進(jìn)化、起源以及多樣性，營養(yǎng)親和性甚至可以作為鑒定病原