忍冬枝枯病病原菌研究.pdf

1、　　目的：調查河南省封丘縣忍冬枝枯現象原因,明確其對藥材金銀花產量和質量的影響。
　　方法：田間調查忍冬枝枯現象的發(fā)生規(guī)律及特點；組織分離法分得不同地區(qū)病株中的共有真菌并進行回接,驗證其致病性；結合形態(tài)學特征鑒定法、rDNA-ITS序列鑒定法、TEF-1α基因部分序列鑒定法,確定病原菌分類學地位；對部分致病菌生物學特性進行考察,研究不同溫度、pH、光照、碳氮源等條件對病原菌生長和產孢的影響；利用田間調查法和高效液相色譜法確定忍

2、冬枝枯病對藥材金銀花產量和質量的影響。
　　結果：
　　1 忍冬枝枯現象發(fā)生特點
　　忍冬枝枯現象在忍冬整個生育期均可發(fā)生,7 -9月為該病高發(fā)期,發(fā)病部位常為成年忍冬枝條或扦插幼苗整株。隨病情發(fā)生和發(fā)展,病枝葉片逐步呈現黃化、邊緣枯萎、脫落現象,并從發(fā)病點沿枝條蔓延,導致枝枯。在高溫高濕條件下,病葉落葉痕或病枝剪口處?？梢姲咨绯鰻罹z。挖出重病植株,偶可見根部發(fā)黑,須根稀少。該病傳播迅速,可在不同枝條或

3、不同植株間傳播,也可經由忍冬扦插苗傳播。
　　2 忍冬枝枯病原菌的分離回接
　　分別用PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養(yǎng)基和WA(水瓊脂)培養(yǎng)基從河南省封丘縣三個忍冬枝枯病高發(fā)區(qū)分離出共有真菌5種,其中PDA培養(yǎng)基中分離出的4種病原菌可以純化,分別命名為 FQ1、FQ2(來自病株莖、葉),FQ3、FQ4(來自病株根部)；WA培養(yǎng)基中分離出的一種真菌來自忍冬病枝活體,命名為FQ0,不能培養(yǎng)。將PDA培養(yǎng)基上分得的4種真菌進

4、行回接驗證,證明其均可致病。
　　3 五種真菌的鑒定
　　綜合利用形態(tài)特征鑒定、顯微特鑒定、rDNA-ITS序列分析及TEF-1α基因部分序列分析等方法確定 5 種真菌的分類學地位,將菌株 FQ1 和 FQ2 鑒定為(Fusarium incarnatum - equiseti species complex),將菌株FQ3、FQ4鑒定為( Fusarium solani species complex ),將 FQ

5、0 鑒定為( Thanatephorus theobromae)。
　　4 四株鐮刀菌的生物學特性
　　研究了四株鐮刀菌 FQ1、FQ2、FQ3、FQ4 在不同溫度、pH、光照及碳氮源條件下的生長和產孢情況。結果顯示,菌株 FQ1,最適菌絲生長溫度為 25℃,最適產孢溫度為 30℃,最適菌絲生長 pH 值為 6-10,最適產孢 pH 值為 8,光照條件對菌絲生長無顯著影響,全黑暗條件有利于產孢,菌絲生長最佳碳氮源分別

6、為淀粉、蔗糖和硝酸鈉,產孢最佳碳氮源分別為山梨醇和硝酸鈉；菌株 FQ2,最適菌絲生長溫度為 30℃,最適產孢溫度為35℃,最適菌絲生長pH值為10,最適產孢p H值為7和 11 ,全黑暗條件有利于菌絲生長和產孢,菌絲生長最佳碳氮源分別為蔗糖和酵母、硝酸鈉,產孢最佳碳氮源分別為果糖和硝酸鈉；菌株FQ3,最適菌絲生長溫度為 30℃,最適產孢溫度為35℃,最適菌絲生長pH值為 9,最適產孢 pH 值為 7 和 10,全黑暗條件有利于菌絲生長和

7、產孢,菌絲生長最佳碳氮源分別為乳糖和甘氨酸,產孢最佳碳氮源分別為葡萄糖和硝酸鈉；菌株 FQ4,最適菌絲生長溫度為 25℃-30℃,最適產孢溫度為 30℃,最適菌絲生長pH值為5-10,最適產孢pH值為9,半光照條件有利于菌絲生長和產孢,菌絲生長最佳碳氮源分別為蔗糖和酵母,產孢最佳碳氮源分別為果糖和酵母。
　　5 田間結蕾量調查證明忍冬枝枯現象能導致田間金銀花結蕾量顯著減少；高效液相分析結果表明,枝枯植株所得金銀花藥材中綠原酸和