乳酸桿菌與枯草芽孢桿菌抗逆性及其對(duì)豬和小鼠益生作用的研究.pdf

1、選用5株腸源乳酸桿菌和1株商用乳酸桿菌LGG以與1株腸源枯草芽孢桿菌作為研究對(duì)象，對(duì)其抗逆性和產(chǎn)酶產(chǎn)酸力及其在豬、鼠中的應(yīng)用效果進(jìn)行研究。
　　 1.以5株腸源乳酸桿菌和1株商用乳酸桿菌LGG為對(duì)象，研究其抗逆性和產(chǎn)酸力。結(jié)果顯示：各菌株對(duì)外界因子的耐受性存在一定的差異。菌株LGG生長(zhǎng)速度、產(chǎn)酸力、耐酸性都較其它菌株好，但其耐高溫能力較差，在65℃處理10min時(shí)存活率只有0.2％；菌株ZJ614耐高溫能力較強(qiáng)，在65℃處理20

2、min存活率仍能達(dá)到19.2％，但在50mg/L，的Cu離子中培養(yǎng)12h，其菌液OD600值僅為0.55，說(shuō)明其對(duì)Cu離子較敏感；菌株ZJ621雖對(duì)酸的耐受性較強(qiáng)，但對(duì)膽鹽較為敏感，在0.1％的膽鹽濃度下，培養(yǎng)8h存活率僅為6.7％；菌株ZJ623雖有較好的生產(chǎn)特性，但是其耐酸性更易受時(shí)間的影響，培養(yǎng)4h和8h對(duì)其存活率影響較大，說(shuō)明其穩(wěn)定性相對(duì)較差；經(jīng)綜合評(píng)價(jià)，篩選出了2株生長(zhǎng)特性、體外環(huán)境耐受性較好的菌株ZJ610和ZJ617。

3、r>　　 2.以1株腸源枯草芽孢桿菌為對(duì)象，研究其抗逆性和產(chǎn)酶力。結(jié)果顯示：①菌株在pH3.0的營(yíng)養(yǎng)肉湯中6h后，存活率仍能達(dá)到47.5％；②在膽鹽濃度為0.3％的營(yíng)養(yǎng)肉湯中8h后，存活率仍能達(dá)到40.4％；③在90℃下，處理20min后存活率仍能達(dá)到33.3％；④當(dāng)Cu離子和Zn離子濃度為500mg/L時(shí)，菌株生長(zhǎng)量相當(dāng)于對(duì)照的107.6％和86.7％；⑤菌株培養(yǎng)48h后上清的蛋白酶和淀粉酶活性分別為655.2U和1.89U。

4、>　　 3.選用篩選出的2株腸源乳酸桿菌ZJ610和ZJ617和1株腸源枯草芽孢桿菌進(jìn)行斷奶仔豬飼養(yǎng)試驗(yàn)。將270頭杜×長(zhǎng)×大斷奶仔豬隨機(jī)分為3個(gè)處理組，分別為對(duì)照組、有抗生素組、混合益生菌組。結(jié)果顯示：①在斷奶仔豬日糧添加混合益生菌后，與對(duì)照組相比，末重、日增重分別提高了0.7％、1.7％，日均耗料、料重比分別降低6.0％、7.7％，差異不顯著；與無(wú)抗生素組相比，末重、日均耗料、日增重分別降低了3.8％、6.7％、8.0％，料重比提

5、高1.7％，差異不顯著。腹瀉指數(shù)方面，對(duì)照組最高達(dá)到2.97％，混合益生菌和抗生素組分別為2.26％和2.24％。②不同處理組糞樣DGGE圖譜的條帶數(shù)存在一定變化，混合益生菌組條帶數(shù)(52.2±5.8)多于抗生素組(48.0±5.6)，少于對(duì)照組(57.2±2.9)，差異不顯著(P>0.05)；對(duì)照組較抗生素組條帶數(shù)高出19.2％，達(dá)到顯著性水平(P<0.05)；混合益生菌組多樣性指數(shù)(1.70±0.05)高于抗生素組(1.66±0.0

6、5)，低于對(duì)照組(1.74±0.02)，差異不顯著(P>0.05)，另外，對(duì)照組較抗生素組多樣性指數(shù)高4.8％，達(dá)到顯著性水平(P<0.05)。③混合益生菌組的細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IL-12含量最高，對(duì)照組最低，三個(gè)處理組之間差異達(dá)到極顯著水平(P<0.01)；TNF-α含量抗生素組明顯高于對(duì)照組和混合益生菌組，且達(dá)到極顯著水平(P<0.01)，但混合益生菌組和對(duì)照組之間差異不顯著(P>0.05)。
　　 4.選用篩選

7、出的2株腸源乳酸桿菌ZJ610和ZJ617和1株腸源枯草芽孢桿菌進(jìn)行小鼠灌胃試驗(yàn)。取6周齡BALB/C雌性小鼠48只，于正飼期每天早上灌服不同處理的10％的脫脂奶粉0.5ml，連續(xù)灌服14d。其中E-coliO157：H7攻毒組E、F、G、H于試驗(yàn)第0d、7d攻毒，攻毒劑量為0.5ml/只含E-coliO157：H7108cfu/ml的10％脫脂奶粉。結(jié)果顯示：①各處理組小鼠日均耗料量和體重隨試驗(yàn)天數(shù)的增加而有逐漸增多的趨勢(shì)，但各組之間

8、差異不明顯。②未攻毒組：對(duì)照組條帶數(shù)最多為(54.67±5.03)，乳酸桿菌組條帶數(shù)最少為(41.00±6.08)，各組之間沒(méi)有顯著差異(P>0.05)；多樣性指數(shù)對(duì)照組組最高為(1.69±0.05)，乳酸桿菌組和混合菌組多樣性指數(shù)最低，都為(1.56±0.06)，各組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。⑧攻毒組：攻毒乳酸菌組條帶數(shù)最多為(48.00±11.14)，攻毒枯草芽孢桿菌組條帶數(shù)最少為(34.00±7.00)，各組之間沒(méi)有顯著

9、差異(P>0.05)；多樣性指數(shù)攻毒乳酸菌組最高為(1.66±0.10)，攻毒對(duì)照組多樣性指數(shù)最少為(1.56±0.06)，各組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。④與對(duì)照組相比，添加乳酸桿菌和枯草芽孢桿菌及其混合菌，對(duì)小鼠血清中IL6、IL10、IL12、TNF-α沒(méi)有顯著性影響(P>0.05)；經(jīng)E-coliO157：H7攻毒，以上指標(biāo)與未攻毒組比也沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)；但經(jīng)攻毒后，TNF-α較未灌胃益生菌組均有提高。較對(duì)