LPS致胚胎著床障礙的分子機(jī)制及槲皮素的保護(hù)作用研究.pdf

1、本試驗(yàn)旨在研究LPS致胚胎著床障礙的分子機(jī)制以及槲皮素的保護(hù)作用研究。本文采用體內(nèi)和體外試驗(yàn)相結(jié)合的方法，研究槲皮素對(duì)細(xì)菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞Bcl-2/Bax凋亡蛋白表達(dá)的影響，以及LPS介導(dǎo)的小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞中TLR4/NF-κB信號(hào)通路以及槲皮素的影響。
　　 體內(nèi)試驗(yàn)將25只孕4d昆明小鼠隨機(jī)分為5組，每組5只。于孕4d尾靜脈注射LPS，于孕5～6d每天灌服不同濃度槲皮素。孕7d剖取子宮，制備組織切片觀察

2、病理學(xué)變化，免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜細(xì)胞Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明，LPS可顯著降低小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞中Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)，顯著提高Bax的陽(yáng)性表達(dá)，明顯降低Bcl-2/Bax的比值。中劑量槲皮素組小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)顯著高于模型組，Bax的表達(dá)顯著低于模型組。這些結(jié)果提示，槲皮素可通過(guò)調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜細(xì)胞中Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表達(dá)，抑制子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡，從而緩解LPS對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的損傷致胚胎著床障

3、礙作用，起到保胎藥效。
　　 體外試驗(yàn)取孕4.5d小鼠，采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞，待細(xì)胞鋪板達(dá)80％后，LPS處理細(xì)胞4h、8h、12h、24h、48h，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中IL-10和TNF-α的含量變化;提取細(xì)胞胞漿和胞核蛋白，Westernblotting檢測(cè)胞漿TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達(dá)的變化。根據(jù)篩選出的LPS劑量，將細(xì)胞分為5組，補(bǔ)充不同濃度槲皮素(10、50、100μmol/L)處理12

4、h后，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中IL-10和TNF-α的分泌變化;HE染色子宮內(nèi)膜細(xì)胞;細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)NF-κB的跨膜表達(dá);Westernblotting檢測(cè)胞漿TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達(dá)的變化;Westernblotting檢測(cè)總蛋白中Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)的變化。細(xì)胞受到LPS作用后，ELISA結(jié)果顯示LPS降低了細(xì)胞中IL-10的表達(dá)，增加了TNF-α的表達(dá)，引起炎癥反應(yīng)，使Th1/Th2偏向于不利妊娠的Th1方向

5、;免疫熒光化學(xué)染色顯示NF-κB蛋白表達(dá)由胞質(zhì)向胞核轉(zhuǎn)位;胞漿中TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達(dá)變化與LPS作用時(shí)間呈正相關(guān)，且兩者表達(dá)變化具有同步一致性。補(bǔ)充槲皮素后，增加了細(xì)胞中IL-10的表達(dá)，降低了TNF-α的表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)，使Th1/Th2偏向有利于妊娠的Th2方向;10μmol/L的槲皮素明顯降低了胞漿中TLR4蛋白和胞核NF-κB蛋白的表達(dá)，有效地緩解了LPS對(duì)細(xì)胞的炎癥損傷作用;槲皮素明顯上調(diào)子宮內(nèi)膜細(xì)胞中Bc