蓖麻油酸12-羥化酶基因的啟動(dòng)子克隆與分析.pdf

1、蓖麻（Ricinus communis L.）是一種含油量較高的油脂植物，蓖麻油含量大約在50％，主要以羥基酸類油脂為主。蓖麻油的合成代謝過程主要在蓖麻的胚乳形成期進(jìn)行，蓖麻油酸12-羥化酶(oleate 12-hydroxylase，F(xiàn)AH12)是整個(gè)代謝中的關(guān)鍵酶。該酶在蓖麻的胚乳中高效表達(dá)，而在莖葉根等器官組織中表達(dá)較少。因此，F(xiàn)AH12基因的啟動(dòng)子具有高效的組織特異性啟動(dòng)基因效果。以此構(gòu)建的特異性表達(dá)載體將在蓖麻胚乳中高效的表達(dá)

2、外源基因，這既保證了外源基因在植物體內(nèi)的有效發(fā)揮，又減少了對(duì)植物的不良影響。
　　本研究以蓖麻通蓖5號(hào)飽滿籽實(shí)為材料，運(yùn)用基因克隆技術(shù)，克隆蓖麻FAH12特異型啟動(dòng)子，以雙元表達(dá)載體pCAMBIA1305.2為基礎(chǔ)，構(gòu)建由FAH12啟動(dòng)子調(diào)控的植物組織特異性表達(dá)載體pCAM5.2-FA，為下一步建立蓖麻高效遺傳轉(zhuǎn)化體系奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)的主要研究結(jié)果如下:
　　經(jīng)生物信息學(xué)分析顯示，F(xiàn)AH12基因上游序列中含有多個(gè)順式作用

3、元件，包括6個(gè)與光響應(yīng)元件（AF-1結(jié)合位點(diǎn)、G-Box、GT-1）;22個(gè)標(biāo)準(zhǔn)啟動(dòng)子調(diào)控元件CAAT-Box;4個(gè)胚乳表達(dá)相關(guān)元件Skn-1模塊;1個(gè)增強(qiáng)子TATA重復(fù)區(qū);14個(gè)TATA核心啟動(dòng)元件;1個(gè)與水楊酸相應(yīng)相關(guān)的TCA序列區(qū)。從生物信息學(xué)角度證實(shí)該啟動(dòng)子序列具有的啟動(dòng)所取的啟動(dòng)元件。
　　本研究結(jié)果表明，F(xiàn)AH12上游序列能夠作為引導(dǎo)外源基因特異性表達(dá)的啟動(dòng)子。特異性表達(dá)載體的成功構(gòu)建對(duì)目的基因在蓖麻籽中高效有序地表達(dá)