玉米WRKY基因啟動(dòng)子的克隆與功能分析.pdf

1、啟動(dòng)子是基因表達(dá)調(diào)控重要的元件，啟動(dòng)子的活性間接反映了它所控制的基因表達(dá)。組織特異性啟動(dòng)子作為啟動(dòng)子的一種，可以啟動(dòng)外源基因在受體植物的特定組織器官中高效表達(dá)，減少不必要的浪費(fèi)。WRKY基因家族是在植物中起特異作用的一類轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，它被證明了參與植物的抗病反應(yīng)，還影響植物的衰老、抗脅迫以及生長(zhǎng)和發(fā)育。
　　 本實(shí)驗(yàn)克隆了一個(gè)玉米WRKY基因的啟動(dòng)子，采用GUS報(bào)告基因?qū)RKY基因的啟動(dòng)子功能進(jìn)行了分析，通過(guò)啟動(dòng)子的刪減實(shí)驗(yàn)，

2、水稻的遺傳轉(zhuǎn)化及組織的GUS染色，取得如下結(jié)果：1、根據(jù)網(wǎng)上預(yù)測(cè)的WRKY基因設(shè)計(jì)引物，從玉米(玉米品種B73)中擴(kuò)增了該基因的啟動(dòng)子部分，命名為P2880，在啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)網(wǎng)站上分析該啟動(dòng)子序列，預(yù)測(cè)到存在TATA盒、CAAT盒和GATA盒等多個(gè)作用元件。2、克隆出WRKY基因上游的啟動(dòng)子并且克隆了4個(gè)5’端缺失啟動(dòng)子，5個(gè)啟動(dòng)子的長(zhǎng)度依次為2880bp、1812bp、1254bp、680bp和355bp。將5個(gè)啟動(dòng)子與含有G

3、US報(bào)告基因的質(zhì)粒pCAMBIA1301連接并構(gòu)建了pCAM2880GUS和4個(gè)5’端缺失啟動(dòng)子載體，將缺失載體分別命名為pCAM1812GUS、pCAM1254GUS、pCAM680GUS和pCAM355GUS。3、用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將所有植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化水稻，獲得了37棵轉(zhuǎn)基因植株。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，pCAM2880GUS載體對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)基因植株愈傷組織染色結(jié)果為藍(lán)色，而pCAM1812GUS、pCAM1254GUS、pCAM680GUS、p