玉米PIP5K基因啟動子的克隆與功能分析.pdf

1、啟動子在植物基因表達調控過程中起著重要作用。對于植物基因啟動子的克隆及其功能研究有助于了解信號傳遞途徑和基因表達調控模式，為植物轉基因工程研究提供理論依據。組織特異性啟動子作為啟動子的一種，在特定組織和一定發(fā)育階段啟動基因的表達，能減少不必要的浪費。PIP5K基因家族作為根特異性轉錄調控因子的一種，在協調植物的生長中起著至關重要的作用，特別是應對環(huán)境因素時，有啟動和促進根毛尖端增長的功能。
　　 本實驗通過生物信息分析PIP5K

2、基因序列，克隆出PIP5K基因的啟動子，并經過啟動子的刪減實驗，水稻的遺傳轉化及水稻組織的GUS染色實驗等，取得結果如下：
　　 1.根據已知報告基因分析預測，設計出特異性引物，以玉米B73基因組DNA為模板，擴增出該基因的啟動子部分，命名為P2036。將P2036啟動子的序列放在啟動子順式作用元件預測網站上進行分析，預測到存在TATA盒、CAAT盒、六個光應答元件和六個與誘導應答先關元件，預測該啟動子是一個具有完整功能的啟動子

3、。
　　 2.依次克隆出4個5'端缺失啟動子，5個啟動子的長度依次為2036bp、1440bp、996bp、651bp和344bp。將5個啟動子與含有GUS報告基因的質粒pCAMBIA1301連接并構建出5個5'端缺失啟動子載體。
　　 3.利用農桿菌介導法將構建的所有植物表達載體轉化水稻，獲得了34棵轉基因植株，對獲得的轉基因植株進行潮霉素檢測，其中21棵檢測為陽性。將檢測為陽性的轉基因各個組織進行GUS染色，根據染色