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1、綿羊支原體性肺炎是由綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoiae, MO)引發(fā)的一種高度接觸傳染性疾病,MO既可感染綿羊,也可感染山羊。
本研究將MO內(nèi)蒙古分離株(SZWQ株)復(fù)活后大量培養(yǎng),提取其基因組。根據(jù)類p102的DNA序列設(shè)計(jì)特異性引物,大量擴(kuò)增類p102基因。由于類p102基因序列中含有一個(gè)編碼色氨酸的密碼子TGA,在原核表達(dá)系統(tǒng)中TGA是終止密碼子,而TGG編碼色氨酸。所以在本試驗(yàn)中設(shè)計(jì)兩對(duì)特異
2、性引物,通過重疊延伸PCR法,將類p102基因的一個(gè)密碼子TGA突變?yōu)門GG,從而使類p102基因在原核表達(dá)系統(tǒng)中順利表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)。結(jié)果顯示:蛋白分子量大小為58kDa,與預(yù)期目的蛋白的大小一致。將純化后的融合蛋白經(jīng)Western Blot檢測(cè)。結(jié)果表明:所表達(dá)出的外源融合蛋白具有良好的反應(yīng)原性。將純化后的融合蛋白制作成疫苗,對(duì)小鼠進(jìn)行動(dòng)物免疫試驗(yàn)。小鼠經(jīng)過4次免疫后,使用ELISA方法檢測(cè)小鼠的血清中有無類
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