綿羊肺炎支原體的分離鑒定及全基因組序列的測(cè)定和分析.pdf

1、綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae，MO)可以引起綿羊和山羊的增生性、間質(zhì)性胸膜肺炎。在全世界有蔓延的趨勢(shì)，給養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的損失，所以對(duì)羊支原體病的研究日益受到人們的重視，本試驗(yàn)從病原的分離鑒定、診斷方法和藥物防治等方面對(duì)MO進(jìn)行了研究，為生產(chǎn)上防治該病提供了依據(jù)。
　　1、通過(guò)對(duì)內(nèi)蒙古四子王旗和達(dá)拉特旗的養(yǎng)羊場(chǎng)中疑似患有傳染性胸膜肺炎的羊只采集肺臟和胸水共33份，對(duì)病料進(jìn)行無(wú)菌剪碎、組織研磨并接

2、種到改良Hayflick培養(yǎng)基中，胸水用0.22μm濾器過(guò)濾后接種到改良 Hayflick培養(yǎng)基中，之后通過(guò)培養(yǎng)和純化后得到12個(gè)分離物。通過(guò)染色鏡檢、生化鑒定和血清學(xué)鑒定，證實(shí)分離物與綿羊肺炎支原體MO標(biāo)準(zhǔn)株Y-98為同種。
　　2、將符合MO的其中3個(gè)菌株，參照NCBI已知MO的16SrRNA的序列設(shè)計(jì)一對(duì)可擴(kuò)增700bp片段的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)株Y98和分離物D13、D27和XJ均擴(kuò)增出與預(yù)期結(jié)果相符的700bp片

3、段。將電泳亮條帶凝膠回收后測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示所測(cè)序列與標(biāo)準(zhǔn)株 Y-98的同源性分別為97.7％、98.6%和100%。該結(jié)果確定了所得分離物為MO的某一成員，證實(shí)以上兩個(gè)地區(qū)羊場(chǎng)中導(dǎo)致羊傳染性胸膜肺炎的主要病原體為MO。
　　3、本實(shí)驗(yàn)室首次采用通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定MO液體培養(yǎng)物的OD450處吸光值的方法繪制了 MO的生長(zhǎng)曲線。通過(guò)對(duì)分離株 D13、D27、XJ和標(biāo)準(zhǔn)株 Y-98在改良Hayflick培養(yǎng)基、改良KM2培養(yǎng)基、改良FM4

4、培養(yǎng)基、改良Hayflick培養(yǎng)基和加入添加劑（OXOID）的支原體基礎(chǔ)培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況繪制了生長(zhǎng)曲線，并通過(guò)分析和比較，結(jié)果證明改良Hayflick培養(yǎng)基是培養(yǎng)MO的最佳培養(yǎng)基。
　　4、本實(shí)驗(yàn)室選取了泰妙霉素、氟苯尼考、卡那霉素、潔霉素、恩諾沙星、新霉素、四環(huán)素、鏈霉素、紅霉素、慶大霉素和羅紅霉素等12中抗菌藥物，對(duì)3個(gè)分離株進(jìn)行了敏感藥物的篩選，其中卡那霉素、泰妙霉素、新霉素、恩諾沙星、氟苯尼考和潔霉素6種為高敏感藥物，此結(jié)