雞傳染性貧血病毒Nested-PCR檢測(cè)方法的建立以及不同CIAV母源抗體水平對(duì)雞群保護(hù)率的影響.pdf

1、雞傳染性貧血病是一種由雞傳染性貧血病毒(Chicken infectious anaemia virus， CIAV）引起的一種臨床上以貧血、骨髓黃染、全身淋巴組織萎縮和免疫機(jī)能損害為主要特征的傳染病。在全球很多地方已經(jīng)普遍出現(xiàn)了感染CIAV的家禽，給雞群造成了極大地危害。除了垂直傳播和水平傳播外，使用了被CIAV污染的弱毒疫苗是其另一重要的傳播途徑之一，而通常其中污染的CIAV劑量較低，需要使用靈敏特異而又快速簡(jiǎn)便的方法來(lái)檢測(cè)。除綜合

2、性生物安全措施外，通過(guò)多種途徑使雛雞獲得一定水平的母源抗體對(duì)于阻止CIAV的感染具有重要意義。本研究建立了針對(duì)CIAV的Nested-PCR方法用于弱毒疫苗中CIAV污染的檢測(cè)并與其它方法開(kāi)展了對(duì)比，此外對(duì)不同滴度的母源抗體阻止CIAV感染和致病中的作用做了系統(tǒng)分析。
　　1．雞傳染性貧血病毒Nested-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用
　　疫苗中污染CIAV是造成CIAV感染的途徑之一，因此加強(qiáng)對(duì)禽弱毒疫苗中CIAV污染的監(jiān)測(cè)

3、對(duì)于種禽場(chǎng)防控CIAV極其重要，而通常疫苗中CIAV污染劑量較低，應(yīng)用一般的技術(shù)難以檢測(cè)到。為了檢測(cè)禽弱毒疫苗中CIAV的污染，本研究根據(jù)GenBank已發(fā)表的CIAV基因序列，針對(duì)其保守區(qū)設(shè)計(jì)了外用引物和內(nèi)用引物，通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)體系和反應(yīng)條件建立了檢測(cè)CIAV的Nested-PCR檢測(cè)方法。結(jié)果顯示，建立的檢測(cè)方法靈敏度高，比常規(guī)PCR靈敏度高100倍。該方法與禽白血病病毒、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒以及雞馬立克氏病毒等病毒基因均無(wú)交叉反

4、應(yīng)，具有很好的特異性。在模擬試驗(yàn)中，該方法可以檢測(cè)到1000羽份弱毒疫苗中1個(gè)EID50的低劑量污染，應(yīng)用該方法從企業(yè)送檢的125批次的疫苗樣品共檢測(cè)出6個(gè)CIAV陽(yáng)性樣品，從45份病料中共檢測(cè)出23個(gè)CIAV陽(yáng)性性品，這與熒光定量PCR檢測(cè)以及PCR結(jié)合核酸斑點(diǎn)雜交檢測(cè)法檢測(cè)結(jié)果基本一致，可以作為這兩種方法的補(bǔ)充或替代，為不同實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)水平的企業(yè)提供了更多實(shí)用性的選擇。
　　2．不同CIAV母源抗體水平對(duì)雞群保護(hù)率的影響

5、r>　　由于CIAV的感染在國(guó)內(nèi)較為普遍，種雞場(chǎng)大日齡雞的抗體陽(yáng)性率較高，因此就可能通過(guò)垂直傳播使雛雞從母雞體內(nèi)獲得一定滴度的CIAV母源抗體，而母源抗體可以在一定程度上保護(hù)雛雞免受CIAV的感染，但是對(duì)于何種抗體水平可以抵抗多少病毒量的感染從未有任何觀察數(shù)據(jù)。本研究通過(guò)人工模擬試驗(yàn)?zāi)M了不同CIAV母源抗體水平對(duì)雞群保護(hù)率的影響。通過(guò)對(duì)不同母源抗體滴度的1日齡海蘭褐雛雞分別按照150 EID50、700 EID50、1500 EID5

6、0劑量進(jìn)行攻毒，觀察其每周的體重、紅細(xì)胞數(shù)目的變化情況，每周采集抗凝血后提取DNA檢測(cè)CIAV核酸，采集促凝血分離血清檢測(cè)CIAV抗體變化。結(jié)果顯示，對(duì)于母源抗體水平較高(15000)的雞來(lái)說(shuō)，攻毒150 EID50后，體重變化和紅細(xì)胞數(shù)目較正常雞差異不顯著，血液中未檢測(cè)出CIAV核酸。CIAV抗體隨著日齡增長(zhǎng)呈現(xiàn)下降狀態(tài)，在六周內(nèi)檢測(cè)CIAV抗體均為陽(yáng)性，免疫器官指數(shù)與正常雞相比差異不顯著。攻毒700 EID50后，體重有輕微減輕的趨

7、勢(shì)，紅細(xì)胞數(shù)目在前四周出現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)，只有個(gè)別雞血液檢測(cè)出現(xiàn)了CIAV核酸陽(yáng)性，CIAV抗體滴度隨著日齡增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，在第6周左右接近抗體陽(yáng)性臨界點(diǎn)，免疫器官指數(shù)與正常雞相比出現(xiàn)了差異。攻毒1500 EID50后，體重下降趨勢(shì)明顯，紅細(xì)胞數(shù)目在前四周急劇下降，部分雞只出現(xiàn)了CIAV核酸陽(yáng)性，CIAV抗體滴度在第5周下降為陰性。對(duì)于母源抗體水平較低(7000)組的雞來(lái)說(shuō)，在各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)中相比于母源抗體水平較高的雞差異更為顯著，且高劑