雞傳染性法氏囊病毒的分離鑒定及其免疫組化檢測方法的建立.pdf

1、傳染性法氏囊病(IBD)是一種危害雞的急性、高度接觸性、病毒性傳染病。除引起3-6周齡易感雞發(fā)生死亡外,可致雛雞免疫抑制,導(dǎo)致雞群對新城疫、馬立克氏病及傳染性支氣管炎等多種主要疫病的免疫失敗。 近年來安徽部分地區(qū)此病發(fā)生有上升趨勢,給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)帶來巨大危害。為了更好的預(yù)防本病的發(fā)生、準(zhǔn)確的診斷此疾病,減少此病對養(yǎng)殖業(yè)的危害,研究本病的在安徽的發(fā)展已經(jīng)迫在眉睫。 有鑒于此,實驗通過以下三個方面對本病進(jìn)行了研究： 首

2、先,從安徽合肥周邊此病爆發(fā)嚴(yán)重的地區(qū)采集疑似法氏囊病例的法氏囊、脾臟等病料組織,接種雞胚尿囊腔,分離病毒,并用瓊脂擴(kuò)散試驗和金膠條試紙進(jìn)行檢測,結(jié)果分離到四株IBDV,分別命名為IBD-1、IBD-2、IBD-7和IBD-9株。對分離的病毒進(jìn)行了動物回歸試驗與免疫指數(shù)測定試驗,初步判定IBD-1株為中強(qiáng)毒株。 然后,利用臨床中分離的病毒IBD-1制備免疫原,免疫家兔制備兔抗雞IBDV高免血清,抗體的效價為1: 128。采用鹽析、

3、透析的方法對所制的高免血清進(jìn)行純化,采用Folin-酚法和紫外分光光度法檢測純化前后蛋白濃度,純化后血清蛋白濃度達(dá)到12mg/mL以上。經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測,可見純化后的血清IgG出現(xiàn)兩條帶,分別為其重鏈和輕鏈,重鏈(H鏈)的分子量大約為53KD,輕鏈(L鏈)的分子量為23KD。結(jié)果表明,純化后的血清IgG達(dá)到了電泳純,提純效果良好。利用制得的IBDV抗體檢測安徽地區(qū)臨床疑似IBD病例,與標(biāo)準(zhǔn)IBDV陽性血清進(jìn)行比較,陽性符合率達(dá)

4、到90％以上。為我們進(jìn)一步進(jìn)行免疫組化研究IBDV的抗原分布規(guī)律提供了必需的抗體。 最后,將IBD-1分離株接種CEF細(xì)胞,觀察IBDV感染后細(xì)胞病變,進(jìn)行免疫組化染色,摸索抗體最佳濃度。后又將病毒接種28日齡非免疫雞,分別于接種后7d,14d剖殺采集病料組織,進(jìn)行組織免疫組化染色,檢測雞法氏囊、脾臟、心臟、肝臟等組織中IBDV的分布。并對相關(guān)試驗條件進(jìn)行優(yōu)化,為研究IBDV感染雛雞后體內(nèi)的抗原定位和動態(tài)分布規(guī)律,闡明IBDV對