水稻核糖體蛋白基因ASL1的圖位克隆與功能分析.pdf

1、水稻葉色突變體在水稻功能基因組研究方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究對一個(gè)新的水稻白化致死突變體asl1進(jìn)行了遺傳定位并對其功能進(jìn)行了初步分析，得到了如下結(jié)論:
　　a.突變體asl1幼苗期呈現(xiàn)出白化葉片，四葉期之后死亡。光合色素測定結(jié)果顯示，突變體中的各種光合色素含量幾乎為零。超微結(jié)構(gòu)分析顯示，突變體中的葉綠體發(fā)育嚴(yán)重受損。
　　b.遺傳分析表明，該突變性狀受一對隱性核基因控制。利用從ASL1/asl1雜合植株與秈稻“培矮64

2、S”雜交產(chǎn)生的F2群體中分離出的3478株突變體型單株作為定位群體，結(jié)合SSR和InDel分子標(biāo)記將ASL1基因定位在水稻第1染色體長臂上的分子標(biāo)記P4和P6之間，其物理距離約為60kb。
　　c.利用生物信息學(xué)和測序手段，初步確定LOC-Os01g48690為候選基因（編碼質(zhì)體核糖體蛋白小亞基20），測序結(jié)果顯示，在LOC-Os01g48690的外顯子上有2bp的缺失。
　　d.組織表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)ASL1基因的表達(dá)有組織特異

3、性，在幼葉中表達(dá)量最高。另外，ASL1的表達(dá)受光的誘導(dǎo)。
　　e.構(gòu)建了4.03Kb的全長基因組互補(bǔ)載體，用農(nóng)桿菌侵染法轉(zhuǎn)化水稻愈傷，得到11株T0陽性轉(zhuǎn)基因植株，并在T1植株中出現(xiàn)性狀分離。
　　f.構(gòu)建了亞細(xì)胞定位載體，結(jié)果顯示ASL1蛋白定位于葉綠體中。
　　g.q-PCR分析顯示，與葉綠素合成和葉綠體發(fā)育相關(guān)的核基因的表達(dá)量嚴(yán)重下降，與光合作用相關(guān)的質(zhì)體基因幾乎沒有表達(dá)。
　　本研究克隆了一個(gè)新的水稻白化