山東省優(yōu)質(zhì)地方品種雞禽白血病病毒分離株亞型鑒定及其分子特點分析.pdf

1、禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus，ALV)為單股RNA病毒，歸類于反轉(zhuǎn)錄病毒科α反轉(zhuǎn)錄病毒屬。AL在禽類中通常引起可傳播的良性和惡性腫瘤。ALV造成的死亡率最低為1％-2％，最高可達20％。感染ALV造成的經(jīng)濟損失主要是免疫抑制帶來的繼發(fā)感染和產(chǎn)蛋下降等亞臨床癥狀。根據(jù)病毒干擾模式、宿主類型、病毒中和作用可劃分為10個亞型，其中能感染雞的為A、B、C、D、E、J。Payne在1988年首次從英國肉雞中分離得到J亞型

2、ALV(ALV-J)，主要引起髓樣細胞瘤，各種品種雞均易感，給全球養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大損失。由于種禽公司加強了對AL的凈化工作，ALV-J的發(fā)病率有很大降低，但在免疫選擇壓和RNA病毒本身遺傳不穩(wěn)定性和多樣性的特點的作用下，可能會促進病毒進一步突變、重組，從而導致宿主范圍擴大、損失更為嚴重。
　　本實驗對分離自山東五大地方品種雞ALV亞型進行分類鑒定，對分離得到的山東地方品種雞的ALV-J分離株gp85基因進行分子特征分析。對與其它致雞

3、腫瘤病病毒共感染的ALV-J代表性毒株進行全基因組測序、分析。本研究發(fā)現(xiàn)，五大品種均感染了ALV-J，ALV-E的片段廣泛存在，其中瑯琊雞、蘆花雞同時存在ALV-A的共感染;而全基因組序列分析發(fā)現(xiàn)，三個不同品種的腫瘤病雞ALV-J分離株的基因組結(jié)構(gòu)之間并無密切關(guān)系，ALV-J基因組結(jié)構(gòu)中與腫瘤發(fā)生相關(guān)的關(guān)鍵基因或作用元件與致病性的關(guān)系需進一步研究。
　　1.鑒定了山東五大地方品種雞群中ALV的主要亞型，并對山東地方品種雞ALV-J

4、分離株gp85基因進行了分子特征分析
　　收集來自山東的魯西斗雞、瑯琊雞的卵白，百日雞、蘆花雞和壽光雞的無菌抗凝血，經(jīng)分離鑒定得到五大ALV分離株DJ146、LYJ15、BR170、LH091101、SG-1。經(jīng)PCR擴增發(fā)現(xiàn)五個地方品種雞均感染了ALV-J;均擴出內(nèi)源性ALV片段，與不能產(chǎn)生傳染性病毒粒子的ev-1，ev-3、ev-6毒株同源性最高，推測為雞基因組所攜帶;同時還發(fā)現(xiàn)，瑯琊雞、蘆花雞存在A亞型ALV(ALV-A)的

5、感染。
　　針對ALV-J的普遍流行情況，挑選另與其它三株ALV-J有其它致雞腫瘤病病毒共感染的分離株(SD1005、SD110503、 BR119)，分析ALV-Jgp85基因的分子特征，探究山東地方品種ALV-Jgp85基因的變異趨勢。分析發(fā)現(xiàn)8個山東地方品種雞的gp85基因氨基酸同源性40.9％-97.4％。其中BR170、DJ46、LH091101、LYJ15、SG-1之間的同源達到98.1％-100％，與國外白羽肉雞原型

6、毒株的同源性為97.8％-98.3％，推測這五個山東地方品種雞ALV-J分離株來源于同一宿主，即國外的白羽肉雞。
　　2.完成了三株與其它致雞腫瘤病病毒共感染的J亞型禽白血病病毒(ALV-J)全基因序列的擴增并對其分子特點進行分析。
　　實驗選取了外源性ALV之間共感染的代表性毒株SD1005（ALV-A與ALV-J）;外源性與內(nèi)源性ALV共感染的代表性毒株BR119(ALV-J與ALV-E);ALV-J與其它致雞腫瘤病病毒

7、共感染的代表性毒株SD100503(ALV-J與REV、MDV)。參照秦愛建等發(fā)表的ALV-J引物，用高保真酶進行全基因組擴增，測序、分析發(fā)現(xiàn)全基因組序列分析發(fā)現(xiàn)SD110503、SD1005的E元件完整為146bp; SD1005在前導序列序列(leader sequence)序列有19bp(576-594)的插入;gp85基因有447bp的缺失。gp85基因負責識別宿主細胞膜上的特異性病毒受體，其結(jié)構(gòu)的改變可能與病毒感染細胞有很大關(guān)

8、聯(lián)。BR119與國內(nèi)早期肉雞ALV-J分離株同源性最近。SD1005、BR119、SD110503來自三個不同品種的腫瘤病雞ALV-J分離株的基因組結(jié)構(gòu)之間并無密切關(guān)系，ALV-J基因組結(jié)構(gòu)中與腫瘤發(fā)生相關(guān)的關(guān)鍵基因或作用元件與致病性的關(guān)系需進一步研究。
　　3.發(fā)現(xiàn)了山東省地方品種泰山柴雞中存在新的ALV重組株感染
　　SD110503的變異株SD110503R為ALV-J與禽膠質(zhì)瘤病毒(Fowl glioma-induc