廣西禽白血病病毒流行株的分子鑒定和分型研究.pdf

1、應(yīng)用該實(shí)驗(yàn)室建立的腫瘤病快速鑒別診斷技術(shù),對(duì)臨床送檢的蒼白消瘦、有腫瘤病變或肝脾腫大的患雞病料或本實(shí)驗(yàn)室保存的DNA樣品250份進(jìn)行ALV的檢測(cè).根據(jù)已經(jīng)發(fā)表在NCBI的ALV-A、B、E亞群的序列情況,分析多態(tài)性酶切位點(diǎn),運(yùn)用不同的限制酶BgⅢ,BamHI,SspⅠ進(jìn)行分型.結(jié)果發(fā)現(xiàn),擴(kuò)增到的目的帶只能用對(duì)A亞群特異的BgⅢ限制酶或?qū)、E亞群特異的SspⅠ限制酶切開,而不能用對(duì)B亞群特異的BamHI限制酶切開.這表明,所擴(kuò)增的片段為

2、A亞群和E亞群的ALV.隨機(jī)將三份由不同地方的DNA樣品擴(kuò)增到的囊膜基因(env)克隆進(jìn)PMD18-T,并轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌,經(jīng)培養(yǎng)并用IPTG、X-gal篩選以后,抽提質(zhì)粒DNA,經(jīng)PCR以及酶切篩選帶有目的片段的rDNA.將SspⅠ酶切陽(yáng)性的三個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序,結(jié)果表明,目的帶分別長(zhǎng)1262bp,1266bp,1268bp,與E亞群ev-1毒株env基因的同源性在96.1-96.5﹪,與B亞群的MAV-2毒株同源性為83﹪-85﹪,