地方品種青腳麻雞禽白血病的感染狀態(tài)調(diào)查及其初步凈化研究.pdf

1、禽白血病(avian leukosis，AL)在雞群中引起的病理變化和臨床表現(xiàn)多種多樣，從免疫抑制、生長遲緩、產(chǎn)蛋下降，蛋品質(zhì)下降等，直到明顯的特征性的腫瘤發(fā)生以至于死亡，致死率較低。禽白血病病毒主要經(jīng)種蛋垂直傳播，水平傳播的能力較弱，從祖代、父母代到商品代逐級放大極難凈化徹底。本研究目的在于以ALV感染水平的調(diào)查為基礎(chǔ)，引進(jìn)血液樣品直接PCR檢測的方法作為禽白血病經(jīng)典凈化方法的有力補(bǔ)充。
　　1.感染狀態(tài)的調(diào)查
　　為了探

2、究禽白血病在山東某地青腳麻雞核心群中感染狀態(tài)，先后采取多種材料檢測禽白血病病毒的存在，包括采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測泄殖腔棉拭子、卵白、細(xì)胞上清、血清中的P27抗原。調(diào)查過程中共涉及9個品系，各品系的泄殖腔棉拭子陽性率:A系為24.97％(227/909)，B系為5.71％(14/245)C系為16.23％(69/425)，D系20.00％(24/120)，E系10.33％(137/1326)，F(xiàn)系為46.67％(14/30)，H系為33

3、.33％(8/24)，S系為0(0/12)，X系為75％(9/12)。病毒的細(xì)胞培養(yǎng)，陽性率為14.8％(71/479)，A系陽性率達(dá)到31.4％(65/206)，D系陽性率為2.46％(4/162)，s系陽性率為16.6％(2/12)。結(jié)果表明，ALV在整個青腳麻原種雞群中的感染率已經(jīng)較高，且不同品系間存在較大差異。
　　2.檢測方法優(yōu)化研究
　　為了提高病毒檢出率，對同一批雞選用多種方法雞進(jìn)行重復(fù)檢測，所有檢測雞只的不同

4、材料編號均一一對應(yīng)。雞卵白抗原p27和對應(yīng)雞只的泄殖腔棉拭子抗原p27陽性率分別為3.3％(1/30)、20％(6/30)，棉拭子抗原p27陽性率明顯比卵白P27陽性率要高，且兩者陽性個體不吻合，說明該雞群泄殖腔排毒率要顯著高于前者，兩者同時檢測可以提高病毒檢出率。血液樣品與泄殖腔棉拭子等對比檢測，結(jié)果顯示，血清、泄殖腔棉拭子ALV-P27抗原陽性率分別為20.34％(36/177)、26.55％(47/177);在CEF上進(jìn)行病毒分離

5、率為1.70％(3/177);血液樣品的直接PCR方法檢出J亞型ALV(ALV-J)的陽性率為0.56％(1/177)，序列結(jié)果分析表明為與經(jīng)典ALV-J分離株的同源性為87.0％～98.4％，但該血液樣品的病毒分離結(jié)果為陰性。本研究表明，血液樣品直接PCR方法檢測ALV-J的應(yīng)用有助于減少禽白血病凈化病毒分離結(jié)果可能出現(xiàn)的缺漏。在此基礎(chǔ)上，優(yōu)化并進(jìn)一步拓展對其他亞型ALV的直接PCR方法檢測，可作為禽白血病經(jīng)典凈化方法的有力補(bǔ)充。

6、r>　　3.ALV核心雞群建立過程中初步凈化研究
　　選擇兩個ALV感染率差距較大的核心品系進(jìn)行AL的凈化和選育工作。
　　具有優(yōu)良性狀但感染率極高的核心品系是由1只具有優(yōu)良性狀的種公雞（ALV陽性），并搭配6只陰性母雞、8只陽性母雞建立起來的。對其第一代全部采血后接DF1細(xì)胞分離病毒，病毒分離率為46.6％(54/116)，泄殖腔棉拭子抗原檢測陽性率為53.45％(62/116)，淘汰陽性雞只隔離飼養(yǎng)。追蹤第二代，第一次檢

7、測部分公雞泄殖腔棉拭子ALV抗原陽性率為6.25％(2/32)，檢測卵白陽性率為1.2％(3/145);第二次檢測，全血PCR方法陽性率5.12％(4/78);第三次無菌抗凝血接細(xì)胞，病毒分離率為0％(0/64)，陽性率降低非常明顯，凈化取得一定成果。
　　感染率較低的核心群的初步凈化結(jié)果如下，第一世代的泄殖腔棉拭子陽性率為8.3％(20/240)，卵白檢測陽性率為8％(8/100)。第二世代根據(jù)目的性狀，選取部分雞只進(jìn)行檢測。細(xì)