地方品系雞白血病流行病學(xué)調(diào)查與ALVp27基因的表達(dá)分析.pdf

1、為了解地方品系雞禽白血病的感染情況以及禽白血病的凈化效果，本研究對(duì)萊蕪黑雞、百日雞、蘆花雞、瑯琊雞、壽光雞和石岐雜雞六個(gè)地方品系雞和經(jīng)兩個(gè)世代凈化的B1、B3兩個(gè)純系雞的禽白血病的抗原和血清進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明:萊蕪黑、百日、蘆花、瑯琊、壽光和石歧雜六個(gè)地方品系雞蛋清P27抗原陽(yáng)性率分別為60.33％、30.40％、37.63％、72.96％、42.11％、5.74％，公雞泄殖腔棉拭子p27抗原陽(yáng)性率分別為71.23％、44.30％、5

2、7.95％、45.83％、70.43％、14.88％，ALV-AB抗體陽(yáng)性率分別為6.82％、7.81％、9.80％、8.57％、19.18％、13.13％，瑯琊雞和石岐雜雞ALV-J抗體陽(yáng)性率分別為1.43％、2.02％; B1、B3兩個(gè)純系雞蛋清p27抗原陽(yáng)性率分別為5.19％、3.34％，公雞泄殖腔棉拭子p27抗原陽(yáng)性率分別為20.51％、25.00％，其子代1日齡胎糞p27抗原陽(yáng)性率分別為6.17％、1.38％。
　　

3、調(diào)查結(jié)果顯示地方品系雞不同品系之間禽白血病病毒陽(yáng)性檢出率差異較大，總體上禽白血病病毒陽(yáng)性檢出率明顯較高，且公雞泄殖腔棉拭子禽白血病病毒陽(yáng)性檢出率普遍高于母雞，下一步應(yīng)重點(diǎn)控制。經(jīng)過(guò)凈化的雞群禽白血病病毒陽(yáng)性檢出率有明顯的下降，J亞群禽白血病病毒得到有效凈化，種群凈化效果較為明顯。本研究通過(guò)調(diào)查初步掌握了當(dāng)前地方品系雞禽白血病的感染情況及凈化的效果，對(duì)下一步禽白血病的凈化和控制提供了一定的理論依據(jù)和參考。
　　 對(duì)地方品系雞p27

4、抗原檢測(cè)為陽(yáng)性的雞采集外周抗凝血，接種DF-1細(xì)胞，連續(xù)傳代兩次后，進(jìn)行p27抗原ELISA檢測(cè)和PCR檢測(cè)，初步確認(rèn)分離毒為ALV，將其命名為YZ株。為進(jìn)一步分析其亞群，針對(duì)gp85設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)行擴(kuò)增、克隆及測(cè)序，同源性分析結(jié)果表明YZ株與ALV-J代表株同源性在91.6％-94.3％，與ALV-AB、ALV-E代表株同源性較低，進(jìn)化關(guān)系分析結(jié)果表明ALV-YZ與AF125527-J株的遺傳距離最近，處于同一個(gè)分支。
　　

5、 根據(jù)已發(fā)表序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物RT-PCR擴(kuò)增ALV-YZ株p27基因，克隆至pMD18-T載體，定向插入到pET32a(+)表達(dá)載體上，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-32a-p27。將構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化受體菌BL21(DE3)，獲得含有重組質(zhì)粒的工程菌，進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)表達(dá)4h時(shí)表達(dá)量最高。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示表達(dá)產(chǎn)物大小約為45KD，與預(yù)期結(jié)果大小相符。Western blotting鑒定結(jié)果表明，該融合蛋白能與