內(nèi)源香蕉條斑病毒(eBSV)的基因型分析及激活.pdf

1、香蕉是一種重要的水果。大多數(shù)香蕉來源于尖葉蕉(M.acuminate，AA)和長梗蕉（M.balbisiana，BB）。栽培的香蕉可分為香芽蕉(AAA)、大蕉(ABB)和粉蕉(ABB)3種主要類型。近年來，香蕉條斑病毒病給香蕉的生產(chǎn)和種質(zhì)交換造成了嚴重的威脅，其病原物為香蕉條斑病毒(Banana streak virus，BSV)。在我國已從廣東香芽蕉中分離出一種BSV，按病毒的分類為BSOLV的一個變種，稱為BSOLV-GD(Bana

2、na streakOL virus Guangdong)。香蕉基因組中發(fā)現(xiàn)了與附加體BSV病毒高度同源的序列，將此序列稱為香蕉的內(nèi)源BSV(endogenous BSV, eBSV)，而將獨立于染色體外的BSV稱為附加體病毒(episomal BSV)。已描述的eBSV具有相似的結(jié)構(gòu)，它們將病毒基因組片段化、重復(fù)和倒置。eBSV具有不同的基因型，可分為感染型和非感染型，感染型的可以激活產(chǎn)生附加體病毒從而引起香蕉發(fā)生條斑病。為明確香蕉中不

3、同基因型eBSV的激活及其機制，根據(jù)長梗蕉中一個與BSOLV-GD相應(yīng)的eBSV(eBSOLV-GD)的結(jié)構(gòu)設(shè)計引物，分析香蕉中eBSV的基因型、eBSV的表達和激活。獲得的結(jié)果如下:
　　1.用多重結(jié)合PCR對23種香蕉材料的附加體病毒進行了檢測，發(fā)現(xiàn)除云南滑粉和雜粉-1號這兩個材料感染了附加體病毒。而其它材料都沒有感染附加體BSOLV-GD。這些沒有感染BSOLV-GD的材料將用于香蕉eBSV激活的研究。
　　2.將BS

4、OLV-GD序列用BLAST進行同源性搜索后發(fā)現(xiàn)來源于長梗蕉的一個細菌人工染色體(bacterialartificial chromosome，BAC)克隆(AP009334)中包含9個與BSOLV-GD同源的片段，并作出了eBSOLV-GD的結(jié)構(gòu)圖。分析BAC克隆中eBSV序列與BSOLV-GD序列的堿基替換，在BAC克隆的eBSOLV-GD區(qū)域中發(fā)現(xiàn)50個核苷酸突變。其中分為21個同義突變(Synonymous Mutation)和

5、24個錯義突變(Missense Mutation)。
　　3.為明確香蕉中eBSV的不同的基因型，根據(jù)eBSOLV-GD的結(jié)構(gòu)設(shè)計引物，采用內(nèi)源條斑病毒基因型分析的方法對所試材料進行分析。結(jié)果表明:只含A基因組的香蕉中不含eBSOLV-GD;含B基因組的香蕉中eBSOLV-GD的基因型可分為7種，部分為感染型的eBSOLV-GD。
　　4.用RT-PCR的檢測方法對eBSOLV-GD的表達進行了研究。結(jié)果表明粉蕉和大蕉中e

6、BSOLV-GD的片段Ⅱ和Ⅲ能表達，并且粉蕉中eBSV片段表達最強，它的表達量大約是大蕉和香芽蕉的3倍。
　　5.選擇5種不含附加體病毒且具有不同eBSOLV-GD基因型的香蕉，經(jīng)組織培養(yǎng)后，調(diào)查香蕉后代條斑病的發(fā)病率。No.1廣粉-1號和高芭粉蕉的發(fā)病率分別達18.0％和16.8％，明顯比香牙蕉和大蕉高，但香牙蕉和大蕉的發(fā)病率沒有顯著差異。發(fā)病率與eBSOLV-GD的基因型無關(guān)，而與香蕉的類型有關(guān)。用M-DB-PCR檢測發(fā)病植株