應(yīng)用脫羰秋水仙堿誘導(dǎo)去核法進(jìn)行小鼠體細(xì)胞核移植的研究.pdf

1、在核移植過程中,供體核(karyoplast)與受體胞質(zhì)(cytoplast)是重構(gòu)胚的兩個(gè)重要組件,尤其后者對(duì)于促進(jìn)核重塑及胚胎進(jìn)一步發(fā)育至關(guān)重要.目前,人們主要是通過顯微操作機(jī)械性的去除核染色質(zhì)來(lái)獲得受體胞質(zhì).但該方法卻存在著技術(shù)要求高,耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞損傷大的缺點(diǎn).近年來(lái)有人嘗試應(yīng)用化學(xué)試劑誘導(dǎo)去除卵母細(xì)胞染色質(zhì),簡(jiǎn)稱誘導(dǎo)去核(IE,Induced-enucleation).國(guó)外多家實(shí)驗(yàn)室對(duì)該方法進(jìn)行了一系列的研究,但并未對(duì)影響

2、誘導(dǎo)去核率的各因素作系統(tǒng)分析,且目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)報(bào)道.因此該研究的主要目的是優(yōu)化脫羰秋水仙堿(Deme,Demecolcine)誘導(dǎo)去核程序,通過在昆明白小鼠上探索性的研究,為應(yīng)用該方法進(jìn)行大動(dòng)物卵母細(xì)胞去核提供一定的資料和經(jīng)驗(yàn).在已有Deme誘導(dǎo)去核技術(shù)路線的基礎(chǔ)上,以昆明白小鼠卵母細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料,對(duì)影響去核率的幾個(gè)因素(包括Deme濃度、Deme處理起始時(shí)間和作用時(shí)間、卵母細(xì)胞的卵齡)逐次進(jìn)行實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明:激活卵母細(xì)胞在濃度為0.

3、4 μg/mL和0.5 μg/mL Deme-KSOM液中處理60 min的去核率分別為27.3%、33.3%,二者之間差異不顯著,但與0.6 μg/mL組(11.9%)相比差異顯著.卵母細(xì)胞在0~5 min之內(nèi)迅速放入0.5 μg/mL Deme-KSOM液中,處理60~180 min得到了相對(duì)較高的去核率(31.9%~24.5%).且激活后0 min起始Deme處理并作用60 min獲得了最高的去核率(31.9%),顯著高于作用30

4、 min時(shí)的去核率(11.5%),但與作用90min、180 min的去核率(29.3%,28.5%)相比差異不顯著.激活后10~15 min之內(nèi)進(jìn)行不同時(shí)間Deme處理均取得了相對(duì)較低的去核率(5.7%~12.0%).卵齡為17~18 h的昆明白小鼠卵母細(xì)胞在激活后迅速放入0.5 μ g/mL Deme-KSOM液中處理60 min,其去核率為27.1%顯著的高于14~15 h和20~21 h組(7.3%,14.1%).依據(jù)優(yōu)化的De