28796.蛋白質(zhì)組學研究證實ptrf是膠質(zhì)母細胞瘤化療耐藥性的重要調(diào)節(jié)因子

1、南方醫(yī)科大學2011級碩士學位論文蛋白質(zhì)組學研究證實PTRF是膠質(zhì)母細胞瘤化療耐藥性的重要調(diào)節(jié)因子ProteomicidentificationofthepolymeraseIandtranscriptreleasefactorasanessentialmodulatorofglioblastomachemoresistance課題來源：國家自然科學基金(81041068，30971183，81372691)廣東省科技計劃(200980

2、30801230)，廣東省自然科學基金(81271314)學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院汪鑫郭洪波教授外科學(神經(jīng)外科)專業(yè)型碩士第二臨床學院答辯委員會主席郭英教授答辯委員會成員陸永建教授李方成教授歐陽輝教授曹志愷教授論文評閱人曹志愷教授趙連旭教授2014年3月10日廣州摘要要的作用。2DDIGE對蛋白分離和量化相當敏感。蛋白質(zhì)通過與不同的熒光染料標記后混合，通過凝膠分離。蛋白質(zhì)組學方法為我們探索腫瘤的多藥耐藥、尋找

3、腫瘤生物標志物和治療靶點方面提供新的機遇。聚合酶I和轉(zhuǎn)錄釋放因子(PTRF)，最早稱為cavinl，在體外培養(yǎng)細胞中參與蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄復合物的解離。PTRF存在于細胞膜表面，與胞膜小泡轉(zhuǎn)運，膽固醇平衡和脂類分解的調(diào)控有關。PTRF突變與人類先天性全身性脂肪代謝障礙有關。基因相互作用研究表明，PTRF除有上述功能外，還可能有其他功能。在前列腺癌和肺癌中，PTRF表達的缺失被認為與腫瘤增殖有關。PTRF的胞質(zhì)微囊結(jié)構(gòu)蛋白和caveolinl在乳

4、腺癌的化療多藥耐藥中有著至關重要的作用。PTRF可誘發(fā)多種體外培養(yǎng)細胞及斑馬魚胚胎細胞中形成豐富的胞質(zhì)微囊。PTRF和caveolinl在細胞質(zhì)微囊中有著密切聯(lián)系。已有報道表明caveolin蛋白位于胞質(zhì)微囊，其對微囊本身有著至關重要的作用。Quann和他的同事發(fā)現(xiàn)，在膠質(zhì)母細胞瘤細胞株u87中過表達caveolinl可抑制細胞生長和生存。與正常腦組織中的星形細胞相比，caveolinl在膠質(zhì)母細胞瘤細胞中的表達量明顯增多。在人類膠質(zhì)母

5、細胞瘤體內(nèi)外模型中，瘤細胞耐受TMZ后影響了caveolinl的表達。然而，PTRF在膠質(zhì)母細胞瘤中的相關研究卻很少。因此，在本實驗中，我們研究PTRF在膠質(zhì)母細胞瘤細胞株及臨床標本中的表達和相關功能。并分析PTRF在膠質(zhì)母細胞瘤細胞耐藥性中的作用。我們的數(shù)據(jù)表明PTRF可成為膠質(zhì)母細胞瘤患者治療的新靶點，對膠質(zhì)瘤的治療可能具有重大意義。目的：本研究通過構(gòu)建膠質(zhì)母細胞瘤細胞系U251的化療耐藥細胞株U251AR，并通過熒光標記的雙向電泳

6、技術及蛋白質(zhì)譜技術測定U251及U251AR差異表達的蛋白；通過westernblot及QRTPCR驗證差異表達蛋白PTI心在各細胞株中的表達。并構(gòu)建干擾質(zhì)粒敲除PTRF在U251及U251AR中的表達，MTT及細胞耐藥性進一步證實PTRF在膠質(zhì)母細胞瘤化療耐藥性中的作用。同時，我們研究PTRF的協(xié)同蛋白caveolinl在U251AR細胞系中表達。最后，我們免疫組化及QRTPCR技術在原發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤及常規(guī)化療后復發(fā)的膠質(zhì)母細胞瘤患