維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究——Cyclophilin A在神經(jīng)分化中的作用.pdf

1、論文題目中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文礦761928維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究——CyclophilinA在神經(jīng)分化中的作用研究生姓名：彭鯤鵬導(dǎo)師姓名：袁建剛教授強(qiáng)伯勤教授彭小忠副教授學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：神經(jīng)系統(tǒng)疾病的蛋白質(zhì)組學(xué)入學(xué)時(shí)間：2001年8月所在院所：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所二00四年六月北京采畿黼勿全_文公在“!璺墊塑墾型查莖堅(jiān)圭蘭垡絲蘭泛，在腦組織中表達(dá)最高，

2、但是CyclophilinA在神經(jīng)系統(tǒng)的功能還不清楚。sH—SY5Y誘導(dǎo)分化后CyelophilinA表達(dá)降低，這種降低所代表的意義是我們感興趣的問題。已有研究表明，熱休克蛋白HSP90具有分子伴侶功能，在神經(jīng)元分化中表達(dá)降低，并且過表達(dá)HSP90可以抑制維甲酸誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化。作為具有分子伴侶活性的另一種蛋白，我們假設(shè)CyclophilinA也具有類似的功能。因此我們將cyclophilinA克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3I／m

3、yc—His()B中，并將其轉(zhuǎn)染SH—SY5Y細(xì)胞，經(jīng)抗生素G418篩選，并經(jīng)RTPCR和Western印跡驗(yàn)證，證明得到過表達(dá)CyclophilinA的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。用維甲酸同樣處理，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)CyclophilinA的SHSY5Y細(xì)胞可以阻礙細(xì)胞分化過程，但不能完全抑制。Western印跡分析表明，分化后的細(xì)胞中NFM和cRet表達(dá)都增加，與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞一致。但是Western印跡檢測(cè)PCNA(增殖細(xì)胞核抗原)發(fā)現(xiàn)，

4、轉(zhuǎn)染cyclophilinA的細(xì)胞誘導(dǎo)分化后PCNA仍有一定表達(dá)，而未轉(zhuǎn)染細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞誘導(dǎo)分化后檢測(cè)不到PCNA表達(dá)。隨后測(cè)定分化后細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，與Western檢測(cè)結(jié)果一致，轉(zhuǎn)染CyelophilinA的細(xì)胞增殖速度高于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞。因此我們推測(cè)，CyclophilinA可以阻礙神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的分化過程，并進(jìn)而影響細(xì)胞增殖速度。為尋找神經(jīng)組織中與CyclophilinA相互作用的蛋白質(zhì)，從而為揭示相關(guān)的生化

5、通路提供線索，本研究以CyclophilinA為誘餌，用酵母雙雜交篩選人胎腦cDNA文庫，發(fā)現(xiàn)CyclophilinA可以與多種己知參與神經(jīng)元分化的蛋白質(zhì)相互作用，另外與CyclophilinA相互作用韻蛋白質(zhì)中有相當(dāng)一部分是與細(xì)胞骨架相關(guān)的蛋白質(zhì)，這些相互作用信息提示我們，CyckIphilinA可能通過它們參與神經(jīng)元發(fā)育分化過程。本研究前期工作中用蛋白質(zhì)組學(xué)方法尋找維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)元分化前后差異表達(dá)的蛋白，并期望從這些差異蛋白質(zhì)分析維