鱖魚(yú)和草魚(yú)Mx蛋白全長(zhǎng)cDNA的克隆及表達(dá)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、該研究克隆得到了鱖魚(yú)(Siniperca chuatsi)和草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)Mx蛋白全長(zhǎng)cDNA基因,并構(gòu)建了鱖魚(yú)Mx蛋白原核表達(dá)工程菌,用于研究Mx蛋白的體外誘導(dǎo)表達(dá),同時(shí),為了探討機(jī)體內(nèi)Mx蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制,該研究對(duì)病毒誘導(dǎo)草魚(yú)Mx蛋白的體內(nèi)組織表達(dá)情況進(jìn)行了初步研究.1、Mx蛋白全長(zhǎng)cDNA的克隆及序列分析該研究以感染了鱖傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)的鱖魚(yú)、感染了草魚(yú)呼腸孤病毒(GCR

2、V)的草魚(yú)為材料,提取肝臟總RNA,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增出Mx蛋白基因的核心片段序列(草魚(yú)Mx蛋白核心片段在該研究前已由該實(shí)驗(yàn)室獲得),再應(yīng)用3'和5'快速擴(kuò)增cDNA末端(RACE)方法PCR擴(kuò)增Mx蛋白cDNA末端,最終獲得鱖魚(yú)Mx蛋白全長(zhǎng)cDNA序列.2、鱖魚(yú)Mx蛋白原核表達(dá)工程菌的構(gòu)建應(yīng)用PCR方法獲得鱖魚(yú)Mx蛋白成熟肽cDNA,將該cDNA片段用PCR方法改造后使其能定向插入融合表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T

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