1、油茶是我國南方重要的木本油料樹種,也是世界上四大木本油料樹種之一。茶油主要由油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸組成,其含量一般在90％以上,這些不飽和脂肪酸是由游離的飽和脂肪酸經(jīng)脫飽和和延長轉(zhuǎn)變而來的。FatB水解飽和脂?；?ACP的硫酯鍵,釋放出游離脂肪酸和ACP,FatB對(duì)于植物油脂庫中脂肪酸的組成有決定性作用。因此研究油茶的FatB基因?qū)τ诮沂居筒栌椭铣傻姆肿訖C(jī)制有重要意義。本論文主要研究結(jié)果如下:
1.油茶FatB基因的
2、部分cDNA序列的克隆。在本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的油茶cDNA文庫中,鑒定出三條FatB基因,經(jīng)過在線Blast比對(duì)確認(rèn)均為假陽性克隆。以FatB為關(guān)鍵詞向GenBank進(jìn)行搜索,找到6條其他植物FatB的氨基酸序列和全長cDNA序列,通過多序列比對(duì)分析,在保守區(qū)設(shè)計(jì)了一對(duì)簡并引物。以構(gòu)建cDNA文庫所用的油茶優(yōu)良無性系--‘湘林1號(hào)’的近成熟種子為材料提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA,通過RT-PCR擴(kuò)增出了一條大小約700bp的條帶,將測序
3、結(jié)果去除引物序列后,得到637bp的部分cDNA序列,該片段編碼212個(gè)氨基酸。
2.油茶FatB基因cDNA完整末端的克隆。根據(jù)簡并PCR獲得的序列信息,設(shè)計(jì)了油茶FatB基因5’RACE用的特異引物5-GSP1、5-GSP2、5-NGSP和3’RACE用的特異引物3-GSP。以‘湘林1號(hào)’的近成熟種子為材料提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備RACE readycDNA,進(jìn)行5’RACE和3’RACE擴(kuò)增。結(jié)果得到了6條約900b
4、p的相似但不完全相同的5’RACE片段和3條約1200bp的相似但不完全相同3’RACE片段,證明油茶FatB基因?qū)儆诙嗷蚣易濉?br> 3.油茶 FatB基因家族成員cDNA完整編碼區(qū)的分離克隆。將5’RACE片段和3’RACE片段比對(duì)后,預(yù)測各片段的起始密碼子和終止密碼子的位置,在起始密碼子上游和終止密碼子下游處分別設(shè)計(jì)引物,以‘湘林1號(hào)’的近成熟種子為材料提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA,通過RT-PCR擴(kuò)增,結(jié)合隨機(jī)測序
5、和生物信息學(xué)分析等方法共分離出油茶FatB基因家族的5個(gè)成員,分別命名為co-fatb1、co-fatb2、co-fatb3、co-fatb4、co-fatb5,其ORF長度分別為1272bp、1311bp、1305bp、1305bp、1263bp。已將上述基因序列提交至 GenBank,登錄號(hào)分別為 FJ899670、FJ899671、FJ899672、FJ899674、FJ899673。發(fā)現(xiàn) co-fatb2、co-fatb3、co
