22197.自組裝elps木聚糖酶聚集體的設計,制備及特性研究

1、學校代碼：10385分類號：（可不填）研究生學號：1200215017密級：（楷體五號）自組裝自組裝ELPsELPs木聚糖酶聚集體的設計木聚糖酶聚集體的設計制備及特性研究制備及特性研究ThedesignpreparationacteristicofselfassembledELPsxylanaseaggregates作者姓名：沈婷婷沈婷婷指導教師：張光亞張光亞教授教授學科：生物化學與分子生物學生物化學與分子生物學研究方向：酶學與酶工程酶

2、學與酶工程所在學院：化工學院化工學院論文提交日期：二零一五年四月十日摘要I摘要本課題鑒于之前的實驗，即以類彈性蛋白多肽ELPs（ELP[KV8F20]）為純化標簽，通過可逆熱循環(huán)（Inversethermalcycling，ITC）純化ELPs木聚糖酶的過程中發(fā)現(xiàn)很大一部分ELPs木聚糖酶融合蛋白形成不溶性聚集體，相變過程出現(xiàn)不可逆。同時該聚集體具有很高的木聚糖酶活力，類似于將木聚糖酶固定化在已發(fā)生相變的ELPs聚集體上。該現(xiàn)象為本課題

3、組首次報導，其形成機制尚未得到考察，由此本課題將從多個角度對該現(xiàn)象產(chǎn)生的機制進行排查。首先，構建帶有木聚糖酶與不同ELPs融合蛋白基因片斷的克隆載體及表達載體。進而表達純化得到不同長度ELPs與木聚糖酶的融合蛋白，考察其酶學性質(zhì)，結果表明各融合蛋白木聚糖酶的最適溫度均在70℃左右，同未連接ELPs的自由木聚糖酶相比，提高了20℃左右，有助于拓寬木聚糖酶在工業(yè)高溫條件下的應用。在木聚糖酶末端連接與之大小相當或大于的ELPs，能提高在低溫條

4、件下的酶活，減少在高溫條件下酶活的損失。融合蛋白的最適反應pH均為7.0，較短的ELPs能使木聚糖酶較適應堿性條件，相反較長的ELPs能使木聚糖酶較適應酸性條件。融合ELPs后的木聚糖酶在堿性條件下保有更多的酶活，改變其對于酸性環(huán)境有一定的耐受性，而在偏堿的環(huán)境中，酶活力受到抑制的現(xiàn)象。連接較長的ELPs有助于進一步提高酶的重復利用性。總而言之將木聚糖酶固定在ELPs有助于提高酶的穩(wěn)定性。其次，為探究木聚糖酶ELPs不溶性聚集體的成因，