青花菜遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及其BO-ACO-,2-基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、以青花菜無菌苗為試材，以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基進(jìn)行了青花菜離體再生體系的建立以及形態(tài)建成過程中生理生化變化的分析。結(jié)果表明：在所選用的子葉、下胚軸、莖段、葉片(分帶主脈和不帶主脈)、葉柄外植體中，以下胚軸和莖段為再生的最適外植體，其芽分化率可達(dá)97％；其余所選外植體按芽分化率計(jì)依次為子葉、不帶主葉脈的葉片切塊、帶主葉脈的葉片切塊、葉柄；外植體取材植株的苗齡不同，其培養(yǎng)后的分化能力不同，萌發(fā)后10d的無菌苗和生根15d的試管苗分別為下胚軸

2、和莖段的最佳取材時(shí)期；在研究所涉及的生長調(diào)節(jié)劑中以6-BA/IBA對芽分化最有效，但不同外植體對6-BA/IBA濃度和配比要求不同，下胚軸與莖段外植體以4.0/0.3mg/L為最適；在MS培養(yǎng)基中附加0.1mg/LNAA對試管苗生根時(shí)間和生根質(zhì)量均有良好作用。對青花菜離體再生過程中生理生化變化分析表明，愈傷組織形成、不定芽分化均與其組織內(nèi)部大分子變化有關(guān)。可溶性蛋白質(zhì)含量在整個(gè)過程中呈增加趨勢，SDS-PAGE電泳譜帶顯示伴隨外植體組織

3、細(xì)胞脫分化、愈傷組織增殖和芽分化有新的蛋白帶出現(xiàn)；過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)活性也隨形態(tài)發(fā)生呈相應(yīng)的變化趨勢。　　在此基礎(chǔ)上用含有正向BO-ACO2表達(dá)載體和反向BO-ACO2表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的青花菜遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究。結(jié)果表明：以子葉和下胚軸為外植體時(shí)，芽分化階段Km的篩選濃度分別為20mg/L和30mg/L時(shí)，篩選效果較好；在芽苗生根階段Km的篩選