17415.刺糖多孢菌amt基因的克隆與功能研究

1、摘要氮素是生物體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸和一些輔因子等含氮化合物的重要組分，它的代謝作為一種重要的生命活動，廣泛存在于所有的生物體中。而氨(銨離子)是被生物體吸收的最為經(jīng)濟(jì)有效的一種氮素形式，是生物體內(nèi)氮素轉(zhuǎn)運(yùn)的的主要形式之一。銨離子作為氮素代謝的中心環(huán)節(jié)，是生物體內(nèi)所有氮源的最終代謝產(chǎn)物和生物體內(nèi)所需的氨基酸、核酸和輔因子等氮類化合物的生物合成的底物。生物體對環(huán)境中的NH4的吸收和NH。在組織間的轉(zhuǎn)運(yùn)，是由位于細(xì)胞原生質(zhì)膜上的N吼轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(銨載

2、體)介導(dǎo)的需能主動運(yùn)輸過程。因此，我們在和刺糖多孢菌親緣關(guān)系較近的天藍(lán)色鏈霉菌(勛印幻叨夠鯽cDP眈D腸r)M145和變鉛青鏈霉菌(^跏印幻，緲c鯽咖fc勉凇)nQ4中過量表達(dá)銨轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ammoniumtransporter)，以期改善M145和TK24的氮源環(huán)境，并進(jìn)一步探討銨轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Amt對M145和nQ4代謝的影響。本論文以刺糖多孢菌(黝幽口唧。腳。陽甲擁os口)基因組為模板擴(kuò)增銨轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(ammoniumtransport

3、ergene)，并對其進(jìn)行測序，經(jīng)過酶切、連接，并回收，將其連入p№18T載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌Topl0，構(gòu)建到大腸桿菌鏈霉菌穿梭載體pⅧ上，再借助接合轉(zhuǎn)移，將該基因?qū)胩焖{(lán)色鏈霉菌M145和變鉛青鏈霉菌TK24中，在雙向啟動子PactI／III的作用下過量表達(dá)銨轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，比較轉(zhuǎn)化子和野生型的表型，分析該基因的過量表達(dá)對天藍(lán)色鏈霉菌M145和變鉛青鏈霉菌TK24代謝的影響。分類號學(xué)校代碼刺糖多孢菌臼聊于基因的克隆與功能研究C10ning