13742.廣西巴馬小型豬tau基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及功能驗(yàn)證

1、分類(lèi)號(hào)UDCS8133碩士學(xué)位論文廣西巴馬小型豬Tall基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及功能驗(yàn)證陳少梅學(xué)科專(zhuān)業(yè)動(dòng)物遣佳直弛墨繁殖指導(dǎo)教師整獨(dú)生砑窒員論文答辯日期2Q13生魚(yú)月3目學(xué)位授予日期答辯委員會(huì)主席蘭王堡數(shù)握廣西巴馬小型豬Tat基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及功能驗(yàn)證摘要Tau蛋白可促進(jìn)微管蛋白聚集形成微管并保持其穩(wěn)定性，過(guò)度磷酸化時(shí)會(huì)在神經(jīng)元內(nèi)形成神經(jīng)纖維纏結(jié)，是阿爾茨海默病的標(biāo)志性病變之一。本研究的目的是通過(guò)克隆廣西巴馬小型豬Tau基因，構(gòu)建

2、其真核表達(dá)載體，并對(duì)其功能進(jìn)行驗(yàn)證，為廣西巴馬小型豬阿爾茨海默病模型的制作奠定基礎(chǔ)。根據(jù)GenBank中豬的Tau基因預(yù)測(cè)序列設(shè)計(jì)引物，以廣西巴馬小型豬腦組織總RNA進(jìn)行RTPCR，獲得的序列與參考序列相比缺少1134bp。應(yīng)用巢式PCR和5RACE進(jìn)行缺失片段的驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)一處編碼區(qū)缺失(3441389bp)和兩處選擇性剪接(191~277bp、1526d1579bp)，由此構(gòu)成了四個(gè)可變剪接體。將4個(gè)序列提交至GenBank中，獲得四

3、個(gè)登錄號(hào)KC473498、KC473499、KC473500、KC473501。參考人的PDGFB基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游序列設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，用于擴(kuò)增PDGFB基因的啟動(dòng)子，獲得PDGF—I)305和PDGF—p1501兩段長(zhǎng)度不同的序列，并克隆至保留啟動(dòng)子的pEGFPN1和不含啟動(dòng)子的pEGFP一1載體中。神經(jīng)細(xì)胞PCI2的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PDGF—p305和PDGF—p1501片段均具有啟動(dòng)子功能，PDGF—p305的啟動(dòng)能力強(qiáng)于PDGF